3、鑒別碳酸鈣

（1）稀鹽酸反應(yīng)法

取膠囊內(nèi)容物0.2g，于10mL試管中，作為樣品；取對(duì)照品碳酸鈣0.1g，于10mL試管中，作為對(duì)照品；按樣品配方和工藝制成不含碳酸鈣膠囊內(nèi)容物0.2g，與樣品同法制成陰性樣品。

在上述3支試管中分別滴入稀鹽酸試液，觀察反應(yīng)的方法實(shí)驗(yàn)后觀察，樣品與對(duì)照品即泡沸，陰性樣品無(wú)此反應(yīng)。化學(xué)反應(yīng)式如下:CaCO₃+2HCl=CaCl₂+CO₂↑+H₂O。其泡沸就是反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生大量CO₂氣體。

（2）草酸銨試液沉淀法

取膠囊內(nèi)容物2.5g，于坩堝中先炭化，轉(zhuǎn)入600⁰C高溫馬弗爐中熾灼3～4h，殘?jiān)?5mL稀鹽酸試液溶解，過(guò)濾至50mL具塞試管中，加1滴甲基紅試液，用氨試液調(diào)至黃色，再加數(shù)滴稀鹽酸試液使呈酸性，作為樣品溶液；取碳酸鈣對(duì)照品0.6g于50mL具塞試管中，加15mL稀鹽酸試液溶解，與樣品同法制成對(duì)照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含碳酸鈣膠囊內(nèi)容物2.5g，與樣品同法制成陰性樣品溶液的方法實(shí)驗(yàn)后觀察，樣品與對(duì)照品析出白色沉淀，放置2h后，試管底部一層白色沉淀更為緊密。

分離該沉淀物，在稀醋酸中不溶，但在稀鹽酸中溶解，陰性樣品無(wú)此反應(yīng)。化學(xué)反應(yīng)式如下:CaCO₃+（NH₄）₂C₂O₄=CaC₂O₄↓（白色）+2NH₃+CO₂+H₂O。

經(jīng)上述2種簡(jiǎn)便的化學(xué)反應(yīng)鑒別法，已能證明樣品中真實(shí)存在碳酸鈣。

4、高效液相色譜法鑒別維生素K1

取膠囊內(nèi)容物2g，于三角瓶中，加0.03mol/L鹽酸溶液5mL，60⁰C超聲提取10min，加無(wú)水乙醇30mL，繼續(xù)超聲20min，取出，放至室溫，轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，作為樣品溶液；取維生素K₁對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇溶解，制成2μg/mL，作為對(duì)照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含維生素K₁膠囊內(nèi)容物2g與樣品同法制成陰性樣品溶液的方法實(shí)驗(yàn)后觀察，樣品及對(duì)照品色譜峰均達(dá)到基線分離，無(wú)拖尾，無(wú)雜質(zhì)峰干擾，K₁主峰保留時(shí)間一致，陰性樣品則在此時(shí)間內(nèi)不出峰，如圖7所示。

《中國(guó)藥典二部》對(duì)于維生素K₁化學(xué)純品，用HPLC正相色譜、紫外、紅外進(jìn)行鑒別。由于K₁屬于脂溶性維生素，又是微囊化產(chǎn)品，在樣品中含量低（10～20μg/g），還有其他成分干擾，因此不能采用藥典化學(xué)純品的方法鑒別，也不能用化學(xué)反應(yīng)和薄層色譜法鑒別。借鑒Thompson等的研究和GB5009.158-2016，其中對(duì)于嬰幼兒和成人營(yíng)養(yǎng)食品中的維生素K1的測(cè)定都采用HPLC方法，柱后還原，熒光檢測(cè)，這種方法提取純化步驟較多。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了優(yōu)化改進(jìn)，樣品先用稀鹽酸超聲打破囊壁，再用無(wú)水乙醇超聲溶解，直接反相色譜分離鑒別。省去了前者蛋白質(zhì)沉淀，異辛烷提取及后者酶解，正己烷提取等很多分離純化的繁瑣步驟，取得較好的效果。方法的檢測(cè)限為15ng/g，符合鑒別要求。

5、高效液相色譜法鑒別維生素D₃

取膠囊內(nèi)容物5g，于具塞試管中，加0.02%（mL/mL）氨水溶液10mL和無(wú)水乙醇25mL，60℃超聲提取10min，取出，放至室溫，吸取正己烷10mL于試管中，搖勻，倒入離心管中，3000r/min離心10min，取上層正己烷作為樣品溶液；取維生素D3對(duì)照品適量，加正己烷溶解，制成0.8μg/mL，作為對(duì)照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含維生素D₃膠囊內(nèi)容物5g，與樣品同法制成陰性樣品溶液的方法實(shí)驗(yàn)后觀察，樣品及對(duì)照品色譜峰均達(dá)到基線分離，無(wú)拖尾，無(wú)雜質(zhì)峰干擾，D₃主峰保留時(shí)間一致，陰性樣品則在此時(shí)間內(nèi)不出峰，如圖8所示。

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