(2)試劑：

所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純?cè)噭?，水為蒸餾水或同等純度水，溶液為水溶液。

①甲醇：經(jīng)濾膜(0.5μm)過(guò)濾。

②稀氨水(1+1)：氨水加水等體積混合。

⑧乙酸銨溶液(0.02 mol/L)：稱(chēng)取1.54g乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。

④碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱(chēng)取2g碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純)，加水至100mL，振搖溶解。

⑤苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/mL)5mL加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量為lmg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。

⑥山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取O.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5mL，加熱溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量為1mg/mL，作為儲(chǔ)備溶液。

⑦苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL。經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾。

3、分析步驟

(1)樣品處理

①汽水：稱(chēng)取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫?cái)嚢璩ザ趸?，用氨?1+1)調(diào)pH約7。加水定容至20mL，混勻，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾，濾液備用。

②果汁類(lèi)：稱(chēng)取5.00～10.Og樣品，用氨水(1+1)調(diào)pH約7，加水定容至20mL，離心沉淀，上清液經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾，濾液備用。

③配制酒類(lèi)：稱(chēng)取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1)調(diào)pH約7，加水定容至20mL，經(jīng)濾膜(0.45μm)過(guò)濾，濾液備用。

(2)高效液相色譜參考條件

①色譜柱：YWG—C₁₈ 4.6mm×250mm，填料粒徑l0μm，不銹鋼柱。

②流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨溶液(0.02mol/L)(5:95)。

③流速：1mL/min或2mL/min。

④檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)230nm，靈敏度0.20或0.10 AUFS。

⑤進(jìn)樣量：10μL。

(3)測(cè)定

①標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

用微量進(jìn)樣器取5μL或者l0μL混和標(biāo)準(zhǔn)液注入進(jìn)樣口中，經(jīng)分析后得到標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，根據(jù)峰面積或峰高對(duì)應(yīng)含量制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

②樣品的定性和定量

用微量進(jìn)樣器取5μL或者101μL混和標(biāo)準(zhǔn)液注入進(jìn)樣口中，根據(jù)峰保留時(shí)間定性，按峰面積或峰高定量，定性和定量工作由數(shù)據(jù)處理機(jī)自動(dòng)進(jìn)行，并打印出測(cè)定結(jié)果。

5、說(shuō)明及注意事項(xiàng)

①此法還可以同時(shí)測(cè)定糖精鈉。

②被測(cè)溶液pH對(duì)測(cè)定和色譜柱使用壽命均有影響，pH＞8或pH＜2時(shí)影響被測(cè)組分的保留時(shí)間，對(duì)儀器有腐蝕作用。以中性為宜。

⑧測(cè)定苯甲酸、山梨酸和糖精鈉也可以用MicroPAK CN-10 4mm×300mm柱，流動(dòng)相可用甲醇-水。

④山梨酸的靈敏波長(zhǎng)為254nm，在此波長(zhǎng)測(cè)苯甲酸和糖精鈉靈敏度較低，苯甲酸和糖精鈉靈敏波長(zhǎng)為230nm，為照顧三種被測(cè)組分靈敏度，方法采用波長(zhǎng)為230nm。

⑤對(duì)共存物進(jìn)行干擾試驗(yàn)表明：蔗糖在230nm處無(wú)吸收，檸檬酸吸收很小，在此色譜條件下，咖啡因和人工合成色素不被洗脫，因此，這些共存物不影響苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的定性、定量測(cè)定。

參考資料：食品中有毒有害物質(zhì)檢測(cè)

相關(guān)鏈接：乙酸銨，碳酸氫鈉，苯甲酸，山梨酸