2、試劑

①甲醇：重蒸。

②丙酮：重蒸。

③乙酸乙酯：重蒸。

④環(huán)己烷：重蒸。

⑤氯化鈉。

⑥無水硫酸鈉。

⑦蒸餾水：重蒸。

⑧凝膠： Bio-BeadsS-X3200～400目。

⑨氨基甲酸酯類農(nóng)藥(NMCs)標(biāo)準(zhǔn)：涕滅威、甲萘威、呋喃丹、速滅威、異丙威，純度均大于99％。

⑩NMCs標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：將五種NMCs分別以甲醇配成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，冰箱保存。使用前取一定量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋配成混合標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。5種NMCs的濃度分別為涕滅威6.0mg/L、甲萘威(西維因)5.0mg/L、呋喃丹5.0mg/L、速滅威10.0mg/L。

3、儀器

①高效液相色譜儀：附紫外檢測器及數(shù)據(jù)處理器。

②旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

③膠凈化柱：長50cm，內(nèi)徑2.5cm，帶活塞玻璃色譜柱，柱底墊少量玻璃棉，用洗脫劑(乙酸乙酯+環(huán)己烷=1+1)浸泡過夜的凝膠以濕法裝入柱中，柱床高約40cm，柱床始終保持在洗脫劑中。

4、操作方法

(1)試樣制備：蛋品去殼，制成勻漿；肉品切塊后，制成肉糜；乳品混勻后待用。

(2)提取與分配

①蛋類樣品：稱取蛋類試樣20g(精確到O.01g)，于100mL具塞三角瓶中，加水5mL(視試樣水分含量加水，使總水量約20g，通常鮮蛋水分含量約75％，加水5mL即可)，加40mL丙酮，振援30min，加氯化鈉6g，充分搖勻，再加30mL二氯甲烷，振搖30min。取35mL上清液，經(jīng)無水硫酸鈉濾于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，濃縮至1mL，加2mL乙酸乙酯-環(huán)己烷(1+1)溶液再濃縮，重復(fù)3次，濃縮至約1mL。

②肉類樣品：稱取肉類試樣20g(精確到O.01g)，加水6mL(視試樣水分含量加水，使總水量約20g，通常鮮肉水分含量約70％，加水6mL即可)，以下按照①的提取、分配步驟處理。

③類樣品： 稱取乳類試樣20g(精確到0.01g，鮮乳不需要加水，直接加丙酮提取)，以下按照①的提取、分配步驟處理。

(3)凈化：將濃縮液經(jīng)凝膠柱以乙酸乙酯-環(huán)己烷(1+1)溶液洗脫，棄去0～35mL流分，收集35～70mL流分。將其旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至約1mL，再經(jīng)凝膠柱凈化收集35～70mL流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用氮?dú)獯抵良s1mL。以乙酸乙酯定容至1mL，留待HPLC分析。

(4)高效液相色譜測定

①色譜條件

a．色譜柱：Altima C₁₈4.6mm×25cm。

b．流動(dòng)相：甲醇+水(60+40)，流速0.5mL／min。

c．柱溫：30℃。

d．紫外檢測波長210nm。

②測定:將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將5μL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣凈化液注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。氨基甲酸酯類農(nóng)藥(NMcs)標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。

5、結(jié)果計(jì)算

按下式計(jì)算試樣中各農(nóng)藥的含量：

式中：X——試樣中各農(nóng)藥的含量，mg/kg；

m₁——被測樣液中各農(nóng)藥的質(zhì)量，ng；

m——試樣質(zhì)量，g；

V₁——樣液進(jìn)樣體積，μL；

V₂——試樣最后定容體積，mL。

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

6、說明及注意事項(xiàng)

①本方法為GB/T 5009.163--2003《動(dòng)物性食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多組分殘留高效液相色譜測定》的方法。本方法適用于肉類、蛋類及乳類食品中涕滅威、速滅威、呋喃丹、甲蓁威、異丙威殘留量測定。

②涕滅威、速滅威、呋喃丹、甲萘威、異丙威為我國常用的氨基甲酸酯類農(nóng)藥。由于動(dòng)物性食品基質(zhì)的特殊性，試樣凈化是測定方法的關(guān)鍵技術(shù)之一；本方法提出了以凝膠滲透凈化技術(shù)進(jìn)行動(dòng)物性食品中涕滅威、速滅威、呋喃丹、甲萘威、異丙威多組分殘留量的測定。③本方法檢出限分別為涕滅威9.8μg／kg，速滅威7.8μg／kg，呋喃丹7.3μg／kg，甲萘威3.2μg／kg，異丙威13.3μg／kg。

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