液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測糕點(diǎn)中31種食品添加劑（一）

發(fā)布時間：2021-07-07 09:34 編輯者：特邀作者周世紅

糕點(diǎn)是以糧、蛋、油、糖、乳等為主要原料，添加適量輔料，經(jīng)調(diào)制、成型、熟制等工序制作而成。糕點(diǎn)中含有糖類、蛋白質(zhì)和脂肪，易受到微生物的污染，而且為延長糕點(diǎn)的保質(zhì)期，商家會過量使用食品添加劑，以增加糕點(diǎn)的貨架期。目前添加劑的種類繁多，有增加顏色的，有防腐作用的，有增加甜味的等等，如著色劑，可以增加樣品的色澤，如糖精鈉，可以增加糕點(diǎn)的甜味，比如山梨酸，能夠抑制微生物的生長達(dá)到防腐作用，這些添加劑的過量使用，對人體的傷害很大，如糖精鈉的過量使用會導(dǎo)致機(jī)體一系列不適反應(yīng)，特別是大劑量使用曾導(dǎo)致嚴(yán)重的中毒事件，毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明其具有潛在的動物致癌性。由于我國食品相應(yīng)法律法規(guī)的不健全，一些不良商家通過超范圍、超量使用添加劑經(jīng)常發(fā)生，對人們的身體健康造成嚴(yán)重的影響。

糕點(diǎn)中常用的食品添加劑包括防腐劑、甜味劑和著色劑等。為了規(guī)范食品添加劑的使用，保障消費(fèi)者的食品質(zhì)量安全，我國GB2760—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對食品添加劑的使用有明確的限量和不得添加都有明確規(guī)定。其中，防腐劑中的脫氫乙酸，在糕點(diǎn)中的使用限量為0.5g/kg，但目前脫氫乙酸的超限量使用現(xiàn)象屢有報道；甜味劑中的糖精鈉，在糕點(diǎn)中不得使用，但因其甜度高、價格低廉，常被不法商家超范圍使用于糕點(diǎn)加工過程。因此，監(jiān)管部門有必要對糕點(diǎn)中添加劑的使用量進(jìn)行嚴(yán)格管理和控制。

食品添加劑的檢測方法有分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液相-質(zhì)譜聯(lián)用法等。分光光度法是利用物質(zhì)對光的吸收光譜，對物質(zhì)進(jìn)行定量或定性的方法，但樣品溶液的穩(wěn)定性、濃度對結(jié)果會造成較大的干擾，致使準(zhǔn)確度相對不高。氣相色譜法適于易揮發(fā)并化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的物質(zhì)，但對沸點(diǎn)較高、不揮發(fā)的物質(zhì)則難以進(jìn)行定量和定性分析，大大縮小了此方法可檢測物質(zhì)的種類。氣質(zhì)聯(lián)用法是目前測定食品添加劑較常用的方法，但由于部分食品添加劑（防腐劑、甜味劑、著色劑等）本身的不易揮發(fā)，在測定過程中需對目標(biāo)物進(jìn)行衍生化，使檢測過程復(fù)雜、靈敏度降低，且基質(zhì)干擾嚴(yán)重，對其結(jié)果造成影響。傳統(tǒng)的分析方法是高效液相色譜法，它是目前用于檢測食品添加劑中最常用的方法。但由于復(fù)雜基質(zhì)對分析的干擾，高效液相色譜法受到一定的限制，如防腐劑及一些色素會出現(xiàn)假陽性，可通過對照品的PAD光譜與假陽性樣品的PAD光譜進(jìn)行對比確認(rèn)，但有些樣品沒有紫外吸收的則無法確認(rèn)。而液相-質(zhì)譜聯(lián)用的適用范圍廣泛，分析效率高，兼具有定性定量的功能，可有效防止假陽性，消除復(fù)雜基質(zhì)的干擾，靈敏度高并能對多種組分進(jìn)行快速測定和篩查。因此，鑒于以上情況，建立一種檢測方法能同時測定糕點(diǎn)中多種食品添加劑就很有必要，本實(shí)驗(yàn)采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，通過優(yōu)化色譜質(zhì)譜條件和前處理方法，對甜味劑、色素以及防腐劑在糕點(diǎn)檢測中實(shí)現(xiàn)同時定性定量的測定，提高檢測效率，完善食品檢驗(yàn)方法。該方法簡便快速、靈敏度高，能在較短時間內(nèi)同時測定糕點(diǎn)中31種添加劑，滿足目標(biāo)化合物的定性定量的要求。

1材料與方法

1.1主要材料與試劑

糕點(diǎn)樣品：均從南寧各超市購入。

試劑：甲醇、乙腈（色譜純，ThermoFisherScientific公司）；乙酸銨（色譜純，德國Sigma公司）；聚四氟乙烯濾膜（0.22μm，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；HLB、PRIMEHLB、MCX、MAX、WCX、WAX固相萃取小柱（150mg，6mL，沃特世科技（上海）有限公司）。

根據(jù)化合物在質(zhì)譜上的電離模式，將31種目標(biāo)化合物分為A、B兩組，其中A組化合物為負(fù)離子模式有：山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、叔丁基羥基茴香醚、叔丁基對苯二酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸芐酯、對羥基苯甲酸丙酯、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、喹啉黃、酸性橙7、酸性綠50、橙黃G、熒光素鈉、酸性藍(lán)3、酸性紫7、甜蜜素、安賽蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、紐甜、糖精鈉和酸性紅G（標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于90%）Dr.EhrenstorferGmbH，BePure和ANPEL公司；B組化合物為正離子模式有：羅丹明B、堿性橙2、堿性橙21、隱性結(jié)晶紫和隱性孔雀石綠藍(lán)（標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于90%）Dr.EhrenstorferGmbH，BePure和ANPEL公司。

ABSCIEXTRIPLEQUAD4500高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國ABSCIEX公司；GradientA10Milli-Q超純水機(jī)：美國Millipore公司；XS205DU電子天平：瑞士梅特勒-托利多公司；MultifugeX3R冷凍離心機(jī)：美國ThermoFisher公司；S180H型超聲波清洗機(jī)：德國Elma公司。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別精密稱取31種標(biāo)準(zhǔn)品約10.00mg，用甲醇配制成質(zhì)量濃度約為1.00mg/mL的單標(biāo)儲備液，于4℃冷藏。再分別吸取0.20mL單標(biāo)儲備液置于100mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，即濃度為2.00μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，于4℃冷藏。

1.2.2混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制

準(zhǔn)確吸取0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別置于10mL容量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，得到質(zhì)量濃度為20、50、100、200、400、600、800、1000ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

1.2.3樣品前處理

準(zhǔn)確稱量樣品1.00g（精確0.001g），置50mL離心管中，加20mL70%甲醇溶液，分2次提取，每次加10mL70%甲醇溶液，超聲15min后冷凍離心5min，得到上清液，將2次提取所得上清液合并后定容至20mL。精密量取上清液5mL通過WAX固相萃取小柱（其預(yù)處理方法：先經(jīng)5mL甲醇洗去小柱中的雜質(zhì)，再用5mL水活化），不收集流出液，先用5mL2%甲酸溶液清洗，再用5%氨化甲醇溶液洗脫并收集在15mL離心管中，在40℃水浴中經(jīng)氮吹至近干再取出放置至室溫，用1mL50%甲醇溶液復(fù)溶殘?jiān)?，?.22μ濾膜過濾后，待測。

1.3儀器條件

1.3.1色譜條件

色譜柱：AtlantisT3色譜柱（3μm，2.1×150mm）；柱溫：40℃；進(jìn)樣體積：5μL。流動相A為乙腈，流動相B為10mmol/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫程序見表1。

1.3.2質(zhì)譜條件

電噴霧離子源（electrosprayionization，ESI）：正負(fù)離子模式同時進(jìn)行；采集數(shù)據(jù)模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；碰撞氣壓力：6.0Psi；霧化氣：55Psi；氣簾氣壓力：40Psi；輔助氣：55Psi；離子源溫度：600℃。各參數(shù)見表2。