（2）不同提取溶劑下的凈化方式考察

苯甲酸在酸性下pH2.5～4.0時，抑菌活性最強，不溶于水，在堿性條件下，溶于水，在食品中添加苯甲酸鈉時，若食品為酸性食品，苯甲酸鈉會轉(zhuǎn)變成苯甲酸；山梨酸在乙醇中易溶，在水中極微溶解，酸性下，不溶于水，在堿性條件下，溶于水，在糕點中使用時，可加入山梨酸，也可以加入山梨酸鉀；糖精鈉易溶于水(1g/1.5mL)，微溶于乙醇(1g/50mL)，耐弱堿性；脫氫乙酸難溶于水，溶于苯、乙醚、丙酮及熱乙醇中，但在堿性條件下，溶于水，根據(jù)這4組分的性質(zhì)，本次試驗沒有同時含有4組分的陽性樣品，選擇了陰性樣品(糕點)進行加標試驗，考察了水、1％乙醇(1％氨水)、5％乙醇(1％氨水)、1％氨水、5％甲醇(1％氨水)、10％甲醇(1％氨水)、水-乙酸鋅-氫氧化鈉7種提取溶劑對4組分峰的影響，稱取糕點樣品14份，每種提取溶劑平行2份，精密加入混合標準使用液2.0mL，按樣品(無奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過濾上機分析，制備供試品溶液，上機測定，得到色譜圖，從圖中可以看出水-乙酸鋅-氫氧化鈉作為提取溶劑，存在峰拖尾現(xiàn)象，而且考慮到后期方法學以及高加入量回收樣品導致的色譜峰分離度達不到要求，故不考慮5％甲醇(含1％氨水)、10％甲醇(含1％氨水)；對于含油脂比較大的辣條類糕點，采用水作為提取溶劑，提取效率不明顯，故也不考慮水作為提取溶劑。

因此，提取溶劑為1％乙醇(1％氨水)、5％乙醇(1％氨水)、1％氨水，為進一步確定提取溶劑，本試驗對這3種提取溶劑進行加標含量測定，稱取糕點、月餅、辣條3類樣品各3份，精密加入混合標準使用液2.0mL，樣品(無奶油蛋糕或面包、辣條、月餅)2g于50mL具塞離心管中，加5％乙醇(含1％氨水)提取，50℃超聲20min，冷卻至室溫，加219g/L亞鐵氰化鉀、106g/L乙酸鋅溶液各2mL，渦旋混勻，于10000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘渣再提取一次，合并2次濾液，定容至刻度。

取15mL提取液，加10mL正己烷，渦旋5min，離心后，吸取下層過濾上機分析。按上述制備供試品溶液，上機測定，外標法定量計算各組分含量，從表中可知，對于分類為糕點的樣品，無論是糕點、月餅還是辣條，當提取溶劑呈偏堿性時，提取率更高，特別是油脂含量高的樣品，偏堿性的環(huán)境更好的保護這4種目標物的損失，故提取溶劑在5％乙醇(1％氨水)時，樣品所得4組分含量都是最高的，綜合考慮，提取溶劑選擇為5％乙醇(1％氨水)。

將篩選出來的堿性提取溶劑測定pH值，分別為：1％乙醇(1％氨水)pH為9.01～9.15；5％乙醇(含1％氨水)pH為9.04～9.15；1％氨水pH為9.25～9.40。然后用正己烷進行提取，稱取糕點樣品，經(jīng)過加標，混合標準使用液3.00mL，理論加標量150mg/kg，試驗上機測定，得到4組分含量結(jié)果見表4。

從結(jié)果中可見，當提取液pH呈酸性時，HLB對目標組分有保留，當呈堿性時，對目標組分保留較低，正己烷萃取1次導致的目標物損失也降低，若萃取2次會使糖精鈉與脫氫乙酸的峰更加接近，可能導致分離度達不到要求，且目標物會有損失，故去除提取液中油脂需在堿性條件下進行。

5、方法學的考察

（1）線性關(guān)系考察

分別精密量取苯甲酸對照品51.28mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0471mg/mL的苯甲酸儲備液；稱取山梨酸對照品51.88mg置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為2.0690mg/mL的山梨酸儲備液；稱取糖精鈉對照品55.10mg置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.9007mg/mL的糖精鈉儲備液，糖精鈉相對分子質(zhì)量為205.16，糖精相對分子質(zhì)量為182.16，兩者折算系數(shù)為0.8874，故折算為糖精濃度為1.6867mg/mL；稱取脫氫乙酸對照品51.71mg置25mL量瓶中，加20g/L氫氧化鈉4mL溶解，用水定容至刻度，即得濃度為2.0477mg/mL的脫氫乙酸儲備液，對照品儲備液5.0mL至100mL容量瓶中，以水定容的混合標準使用液0.00mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL，分別至10mL容量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得到標準線性。

按上述色譜條件進行上機測試，以峰面積為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準線性，得到線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，采用信噪比法評估檢測限，利用已知低濃度的分析物樣品與空白樣品的測量信號進行比較，確定能夠可靠檢出的最小的濃度，典型的可接受的檢出限信噪比是2:1或3:1，結(jié)果見表5，圖3，4組分線性關(guān)系良好，濃度范圍覆蓋1個數(shù)量級，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，濃度范圍覆蓋了GB2760中要求的限量值(糕點類1.09/kg)滿足食品檢測要求。表5結(jié)果表明，各基質(zhì)在本試驗方法下檢測限達到檢測要求，且比國標GB5009.28和SG5009.121要低。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國食品添加劑》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：脫氫乙酸，氫氧化鈉，山梨酸鉀，乙酸鋅