大戟脂為大戟科Euphorbiaceae大戟屬Euphorbia植物多脂大戟E. resinifera Berger的樹(shù)脂狀分泌物，原產(chǎn)歐洲，非洲也有分布。大戟脂具有強(qiáng)筋健骨、散寒止痛、燥濕退腫、通利腸阻、除白內(nèi)障等功效。大戟脂中含有二萜、三萜、倍半萜等化學(xué)成分，其特征性成分為二萜和三萜類(lèi)成分?，F(xiàn)今關(guān)于大戟脂的化學(xué)成分研究報(bào)道較少，人們對(duì)其的開(kāi)發(fā)與研究還具有很大的潛力。在本課題以前的工作中，從大戟脂中分離得到了包括二萜類(lèi)、三萜類(lèi)、甾體類(lèi)、酯類(lèi)等類(lèi)型的化合物。本文繼續(xù)報(bào)道從中分離得到的7個(gè)三萜類(lèi)成分。

1 材料

1.1儀器

Unity-Inova400型和600型超導(dǎo)核磁共振譜儀（美國(guó)Varian公司）；Micromass Autspec-Ultima ETOF型質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；循環(huán)水式多用真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；LC3000型高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；制備型色譜柱為：Positisil C8（10 mm×250mm, 5 μm）。

1.2試劑

HSGF254硅膠（煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所，批號(hào)20170405）；柱色譜硅膠（青島海洋化工廠，批號(hào)20170502）；聚酰胺（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠）；氘代試劑（僑儀生物科技有限公司，批號(hào)20180311）；茴香醛（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)20171205）；柱色譜試劑均為分析純（北京化工廠）；HPLC所用試劑均為色譜純 (百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司)。

1.3 藥材

大戟脂藥材2018年8月購(gòu)自新疆濟(jì)人藥業(yè)有限公司，經(jīng)新疆藥物研究所何江副研究員鑒定為大戟科植物多脂大戟E. resinifera的樹(shù)脂狀分泌物。

2 提取分離

取大戟脂藥材500g粉碎，10倍量的95％乙醇加熱回流提取3次，每次2h，過(guò)濾，合并濾液，減壓回收溶劑得浸膏（266 g）。浸膏以硅膠拌樣后上硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（1:0～0:1）梯度洗脫，得到24個(gè)流分。第12流份(42g)經(jīng)過(guò)聚酰胺柱色譜，以（40%～95%乙醇）梯度洗脫，得到10個(gè)流分（Fr. 1'～Fr. 10'），F(xiàn)r. 6'～Fr. 7'合并共33 g經(jīng)過(guò)硅膠柱分離，依次用石油醚-乙酸乙酯（1:0～0:1），95%乙醇梯度洗脫，得到24個(gè)流分（Fr. 1～Fr. 24）。

其中Fr. 8經(jīng)過(guò)制備型高效液相（乙腈-水80:20, 3.0 mL·min-1）得到化合物3（15.2mg, tR＝79 min）；Fr. 9經(jīng)過(guò)制備型高效液相（乙腈-水72:28, 3.0 mL·min-1）得到化合物4（3.3mg, tR＝37.6 min）；Fr. 11經(jīng)過(guò)制備型高效液相（乙腈-水70:30, 3.0 mL·min-1）及制備薄層（硅膠板，展開(kāi)劑:二氯甲烷-甲醇30:1）得到化合物5（7mg）；Fr. 14經(jīng)過(guò)反相C8柱和硅膠柱層析得到化合物6（3.8mg）；Fr.15~17經(jīng)ODS中壓柱色譜分離，以甲醇為洗脫溶劑，用甲醇（70%～100%）梯度洗脫，得到12個(gè)流分（Fr. a～Fr. l)。Fr. j進(jìn)一步反復(fù)硅膠H柱色譜，以石油醚-二氯甲烷（2:1）洗脫，得化合物1（10 mg）、化合物2（8.0 mg）。Fr. 18經(jīng)過(guò)ODS反相柱，制備型高效液相（乙腈-水65:35，3.0 mL·min-1）得到化合物7（8.6mg, tR＝96.7 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色膠狀固體，易溶于氯仿、丙酮。熔點(diǎn)mp 118℃，=+25°(c=1，MeOH)。UV (MeOH) λmax (logε)：203 (0.338) nm；IR νmax：3428, 2957, 2872, 1709, 1466, 1374, 1293cm-1；HR-ESI-MS m/z 423.36139+（計(jì)算值423.36214），提示其分子式為C30H47O，不飽和度為7。

在1H-NMR數(shù)據(jù)表明了三萜的特征，7個(gè)甲基氫信號(hào)，分別為6個(gè)季碳甲基信號(hào)和1個(gè)仲碳甲基信號(hào)。在13C-NMR顯示了三萜的30個(gè)碳信號(hào)，包括7個(gè)甲基碳信號(hào)(δC：16.82, 17.65, 18.32, 18.401, 9.13, 21.44, 25.74)、9個(gè)亞甲碳信號(hào)(δC：36.31, 34.49, 32.32, 27.87, 27.87, 24.89, 23.45, 29.20, 19.52)、7個(gè)次甲基信號(hào)(δC：51.95, 44.2, 43.73, 35.89；δC：154.06, 126.67, 125.12為烯碳)、7個(gè)季碳信號(hào)(δC：131.01, 49.21, 45.97, 45.33, 29.88, 24.79；δC：205.34為羰基碳)?；衔?的四環(huán)三萜碳骨架與cycloartan-1,24-diene-3,23-dione相似，C-17位側(cè)鏈與cycloartan-24-ene-1R,2R,3R-triol相似。并借助2D NMR圖譜綜合解析對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行一步確證。

通過(guò)1H-1H COSY和HSQC圖譜解析，對(duì)化合物1的NMR譜中氫及其直接相連的碳信號(hào)進(jìn)行了準(zhǔn)確歸屬。在化合物1的1H-1H COSY譜中，根據(jù)H-1/H-2相關(guān)，H-5/H2-6/H-7/H-8依次相關(guān)，H2-11/H2-12依次相關(guān)，H2-15/H2-16/H-17依次相關(guān)，H-20/H3-21、H2-22/H2-23/H-24依次相關(guān)確定了該化合物結(jié)構(gòu)中氫之間存在鄰位偶合關(guān)系的結(jié)構(gòu)片段?；衔?的HMBC譜給出氫與碳的遠(yuǎn)程相關(guān)信號(hào)，即H1-1、H3-28和H3-29同時(shí)與C-3相關(guān)，H2-19與C-1、H1-2與C-10相關(guān)性表明存在A環(huán)。H2-19與C-5、C-8、C-9、C-10相關(guān)和H1-1與C-9和H2-6與C-4的跨環(huán)相關(guān)性建立了9, 19-環(huán)丙基環(huán)和環(huán)B的關(guān)鍵部分。同樣，環(huán)C和D的結(jié)構(gòu)以及21、23側(cè)鏈?zhǔn)怯蛇h(yuǎn)程相關(guān)性建立的，H3-18與C-12、C-13、C-14和C-17相關(guān)，H3-30與C-8、C-13、C-14和C-15相關(guān)性證明了C環(huán)和D環(huán)的存在以及H3-21與C-17和C-22相關(guān)性表明了位于C-17上的CH-20～CH2-23結(jié)構(gòu)單元的存在。綜合以上信息，確定化合物1的平面結(jié)構(gòu)為cycloartan-1,24-diene-3-one。在ROESY譜中顯示H-5/H3-29、H-5/H-7α、H-7α/H3-30、H-8/H3-18、H-8/H-19β、H-19β/H3-28相關(guān)，證明 H-5、CH3-29、CH3-30為α構(gòu)型，H-8、CH3-18、CH3-28為β構(gòu)型。

化合物2白色膠狀固體，易溶于氯仿、丙酮等溶劑。熔點(diǎn)mp 83 ℃，=-17°(c=1，MeOH)。UV (MeOH) λmax (logε)：202 (0.341) , 269(0.254) nm；IR νmax：3 041, 2958, 2867, 2 833, 1 670, 1 644, 1 460, 1377, 1 157 cm-1；HR-ESI-MS m/z425.3778+(計(jì)算值425.37779)，分子式為C30H49O，不飽和度為6。

比較化合物2和1的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，化合物2與同時(shí)分離得到的化合物1的數(shù)據(jù)十分相似，主要區(qū)別是化合物2的NMR譜顯示有一組特征共振信號(hào)，是這2種化合物的唯一區(qū)別，化合物1中的C-3位連接的是羰基，而化合物2中的C-3上連接的是羥基，這是由1H-NMRδH:3.98(t,J=1.9Hz,H-3)，13C-NMRδc:133.49(C-1),128.89(C-2),77.13(C-3),38.35(C-4),29.09(C-9),22.62(C-10),26.56(C-19), 14.24(C-28), 24.68(C-29)確定的。

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