2.3.2不同鹿茸種內(nèi)的特異性

(1）不同基原鹿茸特有性：宋代《夢(mèng)溪筆談》記載：“鹿茸利補(bǔ)陰。凡用茸，無樂太嫩，世謂之茄子茸，但珍其難得耳，其實(shí)少力，堅(jiān)者又太老，唯長(zhǎng)數(shù)寸，破之肌如朽木，茸端如瑪瑙、紅玉者最善”。說明古代本草記述的鹿茸和現(xiàn)今所用的梅花鹿茸相吻合。梅花鹿茸為主流品種，歷史悠久，馬鹿與梅花鹿同屬且親緣關(guān)系近，但本草文獻(xiàn)中少有記載，有學(xué)者認(rèn)為馬鹿茸在我國(guó)被應(yīng)用至少有二三百年以上的歷史，有關(guān)梅花鹿茸和馬鹿茸藥理活性差異的報(bào)道較少。

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)梅花鹿茸和馬鹿茸的鑒別。魏藝聰?shù)冉⒘嘶贑OI和SRY序列的梅花鹿、馬鹿和雜交鹿鹿茸的分析鑒別方法，該方法穩(wěn)定、可靠，能用于梅花鹿、馬鹿和雜交鹿鹿茸的鑒別。地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T 2600-2016也建立了PCR鑒別梅花鹿、馬鹿茸片的方法。本課題組對(duì)梅花鹿茸和馬鹿茸中蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、礦質(zhì)元素、核苷、硫酸軟骨素、生物胺等化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究及分析，未發(fā)現(xiàn)二者有顯著性差異。楊秀偉等研究表明，梅花鹿茸中次黃嘌呤含量較馬鹿茸低，但梅花鹿茸對(duì)單胺氧化酶的抑制作用比馬鹿茸高2倍。

(2）不同形態(tài)鹿茸化學(xué)成分特有性：《本草圖經(jīng)》載：“鹿茸……今有山林處皆有之、四月角欲生時(shí)，取其茸，陰干，以形如小紫茄子者為上?；蛟魄炎尤滋?，血?dú)猹q未具，不若分岐如馬鞍形者有力。茸不可嗅，其氣能傷人鼻”?！侗静輬D經(jīng)》插圖（圖3）中鹿茸呈茄子形，又無分叉等形態(tài)，結(jié)合文中“形如小紫茄子”“馬鞍形者有力”等描述，可見歷代沿用的鹿茸與今商品鹿茸的梅花鹿二杠茸相吻合。

《中國(guó)藥典》2020年版收載的不同形態(tài)鹿茸包括梅花鹿二杠茸、三岔茸和馬鹿三岔茸、四岔茸，此外，梅花鹿初次生長(zhǎng)的毛桃茸也在市場(chǎng)上廣泛流通。同一鹿茸藥材，不同形態(tài)之間化學(xué)成分的差異是Q-Marker特有性的重要體現(xiàn)。本課題組前期對(duì)梅花鹿毛桃茸、二杠茸和三岔茸中蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、礦質(zhì)元素、多糖、生物胺、核苷、硫酸軟骨素等化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的含量測(cè)定及分析，發(fā)現(xiàn)不同形態(tài)鹿茸中硫酸軟骨素、氨基酸等9類成分均呈現(xiàn)出二杠茸含量最高，三岔茸其次，毛桃茸含量最低的規(guī)律。原因可能是毛桃茸源于未成年雄鹿，其生長(zhǎng)發(fā)育不完全，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)率先滿足身體生長(zhǎng)發(fā)育所需不能為鹿茸的生長(zhǎng)提供充足的養(yǎng)分，因此毛桃茸上述成分含量較低。由此可見，借助特異性化學(xué)成分Q-Marker的含量測(cè)定能夠?qū)⒉煌螒B(tài)鹿茸進(jìn)行區(qū)分。

(3）不同生長(zhǎng)階段鹿茸化學(xué)成分特有性：馬鹿鹿角或鹿角脫盤于每年2、3月份脫落，之后進(jìn)入快速生茸階段，馬鹿茸1年通常只采收1茬；梅花鹿鹿角或鹿角脫盤于每年4月份脫落，若采收及時(shí)，梅花鹿鹿茸1年可采收2茬，但二茬茸茸型及品質(zhì)較差。梅花鹿頭茬茸和二茬茸在《中國(guó)藥典》2020年版中均有收載，然而暫無文獻(xiàn)報(bào)道頭茬茸和二茬茸在化學(xué)成分、藥理作用和臨床療效等方面的差異。本課題組通過對(duì)梅花鹿頭茬茸和二茬茸中9類化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，頭茬茸中硫酸軟骨素、膠原蛋白、脂肪酸和核苷4類化合物含量顯著高于二茬茸。希望未來能夠借助特異性化學(xué)成分Q-Marker的含量差異將不同生長(zhǎng)階段鹿茸進(jìn)行區(qū)分。

(4）不同產(chǎn)地初加工方式鹿茸化學(xué)成分特有性：適宜的產(chǎn)地初加工及炮制方法是保證中藥藥效的基礎(chǔ)，市售鹿茸根據(jù)產(chǎn)地初加工方式的不同可以分為煮炸茸、凍干茸、排血茸和帶血茸，《中國(guó)藥典》及各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)中均未明確規(guī)定鹿茸的產(chǎn)地初加工方式，導(dǎo)致養(yǎng)殖戶以客戶要求為由任意加工，一定程度上影響了鹿茸的品質(zhì)。本課題組圍繞不同加工方式鹿茸中化學(xué)成分差異做了大量的工作，系統(tǒng)分析了不同加工方式鹿茸中蛋白質(zhì)、氨基酸等9大類成分中百余個(gè)組分發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地初加工方式對(duì)鹿茸中化學(xué)成分含量影響顯著，凍干茸對(duì)蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸等的保留優(yōu)于煮炸茸，帶血茸對(duì)蛋白質(zhì)、氨基酸、礦質(zhì)元素等的保留顯著優(yōu)于排血茸。

此外，雖然在外觀上凍干茸易于與煮炸茸區(qū)分，但切片、粉碎后難于分辨。本課題組建立了鹿茸中美拉德反應(yīng)產(chǎn)物標(biāo)志性成分5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural,5-HMF）、羧甲基賴氨酸、羧乙基賴氨酸和糠氨酸等分析方法，通過對(duì)不同加工方式鹿茸中上述成分含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，煮炸茸中5-HMF等美拉德反應(yīng)產(chǎn)物顯著高于凍干茸，帶血茸顯著高于排血茸。導(dǎo)致上述結(jié)果的原因?yàn)槁谷谉峒庸み^程中高溫加劇了美拉德反應(yīng)產(chǎn)物產(chǎn)生更多5-HMF等物質(zhì)，帶血茸中富含能發(fā)生美拉德反應(yīng)的氨基化合物和羰基化合物，其易反應(yīng)生成更多5-HMF等物質(zhì)。未來期望在規(guī)范鹿茸產(chǎn)地初加工標(biāo)準(zhǔn)方法的基礎(chǔ)上篩選不同加工方式鹿茸中Q-Marker，加強(qiáng)對(duì)鹿茸產(chǎn)地初加工的監(jiān)管和檢查。

2.4鹿茸中Q-Marker的可測(cè)性

Q-Marker的可測(cè)性是基于點(diǎn)-線-面-體的質(zhì)量控制模式建立的中藥多元質(zhì)量控制方法，包括指標(biāo)成分、指示性成分、類成分和全息成分。

指標(biāo)成分能反映中藥的特異性、區(qū)別于其他藥材的功能屬性，是評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量?jī)?yōu)劣和合格限度的“金標(biāo)準(zhǔn)”。考慮到鹿茸的構(gòu)效關(guān)系及功效發(fā)揮多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)，硫酸軟骨素、羥脯氨酸等成分十分契合指標(biāo)成分的篩選原則，在此基礎(chǔ)上需建立γ-氨基丁酸等相結(jié)合的多指標(biāo)含量測(cè)定方法。

指示性成分系中藥中含量大、功效類似的代表性成分。目前NY/T 1162-2006和NY/T 1618-2008采用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)鹿茸中17中氨基酸進(jìn)行含量測(cè)定，進(jìn)而評(píng)價(jià)其質(zhì)量。鑒于氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)氨基酸分析的普適性，建議增加羥脯氨酸和γ-氨基丁酸等特異性指標(biāo)，加強(qiáng)對(duì)鹿茸質(zhì)量控制的科學(xué)性、合理性。

類成分指結(jié)構(gòu)相似的一類成分。不同于人參等植物藥可用總皂苷等類成分對(duì)其總體功效進(jìn)行評(píng)價(jià)，鹿茸中無結(jié)構(gòu)明晰、功能明確的類成分。鑒于課題組前期研究成果，現(xiàn)階段建議以總蛋白、總多糖、總脂肪酸、總灰分等指標(biāo)在“面”的層面對(duì)鹿茸質(zhì)量進(jìn)行控制。

全息成分是在所用分析方法下顯現(xiàn)成分及其理化和波譜學(xué)信息，指紋圖譜技術(shù)是常用的基于全息成分的模式識(shí)別方法，目前多用于評(píng)價(jià)質(zhì)量的一致性。孫偉杰等建立了鹿茸中6種核苷類成分的指紋圖譜，該方法對(duì)鹿茸飲片質(zhì)量控制具有一定的指導(dǎo)意義和參考價(jià)值。

2.5鹿茸中Q-Marker的傳遞與溯源性

2.5.1鹿茸不同炮制品中Q-Marker的傳遞與溯源性

《中國(guó)藥典》2020年版中收載的鹿茸炮制品包括鹿茸粉和鹿茸片，本課題組分析了鹿茸不同炮制品中化學(xué)成分含量差異發(fā)現(xiàn)，鹿茸粉與鹿茸片中均能檢測(cè)到前文多次提到的鹿茸中Q-Marker的備選成分硫酸軟骨素、羥脯氨酸、γ-氨基丁酸等，體現(xiàn)了鹿茸中Q-Marker由中藥材向中藥飲片的傳遞與溯源性，但與鹿茸粉相比鹿茸片中多糖、核苷等成分略有減少。

2.5.2鹿茸不同飲片切制部位中Q-Marker的傳遞與溯源性

鹿茸片是市售鹿茸的主要流通形式，根據(jù)飲片切制部位的不同又被分為蠟片、粉片、紗片和骨片。本課題組對(duì)不同部位鹿茸中化學(xué)成分含量進(jìn)行了細(xì)致的比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)不同部位鹿茸中化學(xué)成分含量差異明顯，蠟片中蛋白質(zhì)、氨基酸等含量顯著高于其他部位，其他部位無明顯差異；不同部位鹿茸中硫酸軟骨素和糖類物質(zhì)表現(xiàn)出蠟片含量最高，粉片、紗片和骨片含量依次遞減的規(guī)律；不同部位鹿茸中礦質(zhì)元素（尤其是鈣和鎂）呈現(xiàn)出蠟片含量最低，粉片、紗片和骨片含量依次增高的規(guī)律。鹿茸系軟骨組織分化而來，越靠近頂部分生組織越活躍，蛋白質(zhì)、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)越豐富；基部逐漸鈣化，鈣、鎂等礦質(zhì)元素含量逐漸增加。不同飲片切制部位鹿茸中化學(xué)成分差異性分布是Q-Marker傳遞與溯源性的體現(xiàn)。

2.5.3不同鹿制品中Q-Marker的傳遞與溯源性

《中國(guó)藥典》2020年版一部收載的鹿制品包括鹿茸、鹿角、鹿角膠和鹿角霜。鹿茸系幼嫩的軟骨組織，若不及時(shí)采收組織骨化后便形成鹿角，采收后的角基于次年春季脫落形成鹿角脫盤。鹿角膠系鹿角或鹿角脫盤經(jīng)粉碎、熬制、濃縮而成的膠塊，鹿角霜系鹿角膠熬制后剩余的殘?jiān)?。整體而言，鹿制品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)均相對(duì)匱乏，鹿茸及鹿制品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)亟待提高。本課題組曾對(duì)不同鹿制品中的硫酸軟骨素、羥脯氨酸和γ-氨基丁酸含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)，不同鹿制品中上述成分含量差異顯著，鹿茸中硫酸軟骨素含量最高，鹿角膠中羥脯氨酸含量最高，鹿角和鹿角霜中γ-氨基丁酸含量最低。鹿茸、鹿角、鹿角膠和鹿角霜均是鹿茸生長(zhǎng)不同階段的產(chǎn)物及制品，不同鹿制品中化學(xué)成分含量差異是Q-Marker傳遞與溯源性的體現(xiàn)，硫酸軟骨素、羥脯氨酸和γ-氨基丁酸在不同鹿制品中的差異分布是其具備作為鹿茸中Q-Marker備選的良好體現(xiàn)。

綜上所述，鹿茸由軟骨組織發(fā)育而來，其中富含豐富的血管和神經(jīng)組織，硫酸軟骨素、羥脯氨酸和γ-氨基丁酸等是其中相對(duì)特異性的化學(xué)成分（特有性），具有抗關(guān)節(jié)炎、抗骨質(zhì)疏松、抗疲勞等生物活性（有效性），與中醫(yī)藥理論認(rèn)為的“壯腎陽、強(qiáng)筋骨”等功能主治非常吻合（中醫(yī)藥理論相關(guān)性），在鹿茸飲片及炮制品中均能被檢測(cè)到（可測(cè)性、傳遞與溯源性），符合Q-Marker的5大基本原則。

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