改進(jìn)的QuEChERS-UPLC-MS/MS法測(cè)定動(dòng)物源性食品巾13種全氟化合物（三）

發(fā)布時(shí)間：2021-05-30 16:14 編輯者：特邀作者周世紅

因此，本實(shí)驗(yàn)采用AtlantisT3色譜柱，以2.5mmol/L乙酸銨甲醇溶液-2.5mmol/L乙酸銨水溶液進(jìn)行梯度洗脫。圖3可見(jiàn)15種物質(zhì)在12min內(nèi)全部流出，日標(biāo)化合物保留時(shí)間適中，峰面積、信噪比較高，雜峰響應(yīng)較??；在空白基質(zhì)中添加日標(biāo)化合物，在上述檢測(cè)條件下，譜圖無(wú)干擾雜峰，13種PFCs響應(yīng)好。隨碳鏈的增加，PFCs在C₁₈柱上的保留逐漸增強(qiáng)，同一碳鏈數(shù)全氟磺酸類(lèi)化合物保留強(qiáng)于全氟羧酸類(lèi)化合物。PFBA最先流出，PFDoS最后流出。

2.1.2質(zhì)譜條件選擇

PFCs化學(xué)結(jié)構(gòu)中具有羧基或磺酸基，因此采用負(fù)離子模式檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用流動(dòng)注射進(jìn)樣方式，分別對(duì)5μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行m/z200-1000ESI一級(jí)全掃捕，南實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PFCs主要以電離后失去羥基上氫原子[M-H]^-最強(qiáng)，確定其為準(zhǔn)分子離子，并優(yōu)化噴霧電壓、蒸汽溫度、離子傳輸管溫度以獲得較強(qiáng)的響應(yīng)值。接下來(lái)，以其作為母離子進(jìn)行子離子掃描并優(yōu)化碰撞能量，確定定性離子和定量離子。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，PFCAs生成[M-H-44]^-子離子，推斷是PFCAs發(fā)生中性丟失CO₂產(chǎn)生；PFSAs生成m/z99和m/z80子離子，推斷是PFSAs斷裂生成[FSO₃]和[SO₃]^-。本次實(shí)驗(yàn)選是PFSAs斷裂生成[FSO₃]和[SO₃]。本次實(shí)驗(yàn)選取豐度較高且干擾較少的子離子[M-H-44]-和[SO₃]^-分別作為PFCAs和PFSAs的定量離子。

2.2前處理優(yōu)化

針對(duì)動(dòng)物源性食品(肝臟、腎臟、肌肉)基質(zhì)復(fù)雜、含有大量蛋白質(zhì)及內(nèi)源性物質(zhì)等特點(diǎn)，本研究采用改良的QuEChERS樣品前處理方法，酸化乙腈提取，C₁₈、PSA和GCB混合吸附劑分散固相蒂取凈化，減少基質(zhì)巾雜質(zhì)干擾、提高回收率。

2.2.1提取溶劑優(yōu)化

已報(bào)道的文獻(xiàn)中采用乙腈、鹽酸-乙腈作為提取溶劑提取動(dòng)物源性食品的肌肉和肝臟基質(zhì)中的PFCs。鑒于乙腈是常用的動(dòng)物源性食品有機(jī)提取溶劑，而且PFCs是酸性化合物，在酸性環(huán)境下呈非解離狀態(tài)，有利于進(jìn)入有機(jī)相，所以本實(shí)驗(yàn)選擇鹽酸-乙腈作為提取溶劑。

同時(shí)，考察了0.05％、0.1％、0.2％、0.3％網(wǎng)個(gè)不同濃度鹽酸-乙腈對(duì)動(dòng)物源性食品中13種PFCs的提取同收率。圖4結(jié)果表明，在0.05％～0.3％范同內(nèi)，9種PFCAs的回收率基本是逐漸增加趨勢(shì)，4種勢(shì)，0.1％、0.2％、0.3％鹽酸-乙腈的回收率均在合理范圍內(nèi)，分別為76.3％～114.6％、95.3％～119.4％、85.8％～118.9％。上述三個(gè)濃度都是適宜的提取濃度，但0.2％鹽酸-乙腈的回收率較集中，分布在95％～120％之問(wèn)，最低回收率95.3％均高于其他兩個(gè)濃度；同時(shí)為避免增加鹽酸用量對(duì)后續(xù)分析產(chǎn)生十?dāng)_，所以選擇0.2％鹽酸-乙腈作為提取溶劑。在提取過(guò)程中，0.2％鹽酸-乙腈使樣品基質(zhì)中大量蛋白質(zhì)變性形成沉淀，并通過(guò)高速離心去除。但含脂量較高的樣品進(jìn)行蛋白沉淀時(shí)，易將樣品中的脂肪和水溶性雜質(zhì)也提取出來(lái)，造成提取液混濁，可能對(duì)LC-MS/MS分析產(chǎn)生基質(zhì)干擾，因此對(duì)提取液要進(jìn)一步凈化。

2.2.2凈化方式優(yōu)化

QuEChERS方法是使用分散固相葦取技術(shù)凈化，通過(guò)將固相吸附劑直接加入到樣品提取液中來(lái)達(dá)到吸附干擾物質(zhì)的目的。動(dòng)物源性食品中存在蛋白質(zhì)、碳水化合物、色素、脂肪、甾醇等物質(zhì)，可以通過(guò)采用不同類(lèi)型吸附劑達(dá)到凈化效果。已有文獻(xiàn)選用C₁₈、PSA、GCB三種吸附劑單一或不同配比進(jìn)行PFCs凈化，但存在樣品基質(zhì)種類(lèi)較少或檢測(cè)項(xiàng)目少等缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)比較了3種吸附劑單一和混合方式對(duì)動(dòng)物源性食品的肝臟、腎臟和肌肉中多種PFCs的凈化效果及回收率。

2.2.2.1C₁₈優(yōu)化

C₁₈主要吸附脂肪和酯類(lèi)等非極性共萃物。通過(guò)在空白樣品中添加目標(biāo)物，做2μg/kg添加濃度3個(gè)平行，比較40～100mg單一吸附劑C₁₈對(duì)PFCs回收率的影響，發(fā)現(xiàn)隨著C₁₈用量由40mg增加到80mg，同收率亦增加，在80mg達(dá)到88.4％～116.3％(見(jiàn)圖5)；由80mg增加到100mg，大多數(shù)PFCAs回收率基本保持不變，4種PFSAs和PFHpA、PFDA回收率有所下降，但13種PFCs回收率仍處于85.5％～118.0％的合理范圍(見(jiàn)圖5)。因此采用合理同收率的最小用量80mg。但凈化后的溶液有色素殘留，會(huì)污染色涪柱及檢測(cè)儀器，需要進(jìn)一步去除色素。

2.2.2.2PSA優(yōu)化

PSA是一種弱陰離子交換劑，可以吸附碳水化合物、有機(jī)酸、少量色素等極性干擾物質(zhì)。在空白樣品中添加日標(biāo)物，做2μg/kg添加濃度3個(gè)平行，在80mgC₁₈凈化基礎(chǔ)上，同時(shí)加入80～140mgPSA觀察PFCs的叫收率變化情況。由圖6可以得知隨著PSA用量的增加，PFCAs回收率呈先上升后下降趨勢(shì)，并在100、120mg時(shí)回收率達(dá)到合理最大值；PFSAs同收率呈下降趨勢(shì)，80、100mg同收率是83.9％～92.1％。綜合考慮，選擇100mgPSA為最佳用量。但凈化后的溶液有色素殘留，需要加入GCB去除。