2、儀器及設(shè)備

電熱水浴鍋。

3、試劑

(1)硫酸溶液[C(H₂SO₄)=l mol·L^-1〕。

(2)CaCO₃(化學(xué)純);

(3)酚酞指示劑:稱取酚酞指示劑0.5g,溶于100 mL的95%乙醇溶液中;

(4)夏費(fèi)-索姆吉試劑:稱取無水Na₂CO₃(分析純)25. 0g和酒石酸鉀鈉(KNaC₄H₄O₆·4H₂O，化學(xué)純)25.0g放入2L燒杯中，加水約500 mL使其溶解。將一漏斗的頸端插入液面以下，在不斷攪拌下，通過漏斗加硫酸銅溶液［(CuSO₄·5H₂O)=100g·L^-1]75mL。再加入Na HCO₃(分析純)20g,溶解后再加入KI(化學(xué)純)5g，轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，加入碘酸鉀溶液〔c(KIO₃)=0.0167mol·L^-1〕250mL，用水定容。用砂芯坩堝過濾，放置過夜備用;

(5)碘化鉀-草酸鹽溶液:稱取KI(化學(xué)純)2.5g和K₂C₂0₄(化學(xué)純)2.5g溶于水中，并稀釋至100 mL，每周現(xiàn)用現(xiàn)配。

(6)Na₂S₂0₃標(biāo)準(zhǔn)貯存溶液[c(Na₂S₂0₃·5H₂O)=0.1mol·L^-1]:稱取Na₂S₂0₃·5H₂O(分析純)25. 0g溶于1L煮沸后已冷卻的水中，加入Na₂CO₃0. 1g,盛于棕色瓶中，貯放在低溫暗處。一天后進(jìn)行標(biāo)定;

溶液的標(biāo)定稱取已在130^oC烘干2h K₂Cr₂0₇(分析純)0.20g(準(zhǔn)確至0. 0001g )，放在250 mL三角瓶中，溶于含有2gKl的80 mL水中，邊攪邊加入鹽酸溶液[c(HCI)=1mol·L^-1]20 mL，在暗處放置5 min后，用Na₂S₂0₃溶液滴定。當(dāng)溶液由橙紅色變?yōu)闇\黃綠色時(shí)，加入淀粉指示劑10滴，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色(Cr³⁺的顏色)為止。計(jì)算Na₂S₂0₃溶液的準(zhǔn)確濃度;

(7)硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[[c(Na₂S₂O₃·5H₂O)=0. 005mol·L^-1]:稀的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，須在使用當(dāng)天用經(jīng)煮沸的冷水準(zhǔn)確稀釋貯存液至恰為0.005mol·L^-1;

(8)淀粉指示劑:稱取可溶性淀粉1.0g和HgI₂(防腐劑) 2mg，用少量水調(diào)研，溶于100mL沸水，冷卻后使用。

4、操作步驟

(1)糖溶液的提取

水提取法:清除新鮮水果、蔬菜樣品外來污染的雜質(zhì)，盡可能快地磨細(xì)或切碎，混勻，稱取樣品25.00g～50.00g(含糖約2.5 g),置高速組織搗碎機(jī)中，加適量水后搗碎(或置研缽中加少量純石英砂共同研磨)，然后小心移入250mL容量瓶中，加水至約150 mL?；蝻L(fēng)干已磨細(xì)的樣品則可稱取0.500g～5.00g，洗入250 mL容量瓶中，亦加水至約150mL。然后加入粉狀CaCO₃ 0.5g～1.5g中和樣品中的酸度(防止浸提過程中蔗糖水解)，搖動(dòng)1 min,置于80℃水浴中保溫浸提0.5h，其間搖動(dòng)數(shù)次以利糖分浸提完全。冷卻，滴加中性乙酸鉛溶液(試劑2)至產(chǎn)生白色絮狀沉淀(約2 ml～5 mL)，充分搖動(dòng)混合，靜置15 min，再滴加幾滴中性乙酸鉛溶液于上部清液中檢查是否沉淀完全。如果還有沉淀形成。再搖動(dòng)，靜置，直至不產(chǎn)生白色絮狀沉淀為止，用水稀釋定容。用干濾紙過濾。加入足量固體草酸鈉到濾液中，使鉛沉淀完全，再用干濾紙過滋，再加少許固體草酸鈉到濾液中，檢查鉛是否沉淀完全。確認(rèn)無鉛后，濾液待用。

（2）還原糖的測(cè)定

吸取5mL(約0.5mg～2.5 mg還原糖)待測(cè)液放入25 mm×200mm試管中，加索姆吉試劑5 mL，搖動(dòng)混勻。試管口蓋以漏斗，在沸水浴中加熱15min，小心將試管平穩(wěn)地置于流動(dòng)冷水浴中4min;去蓋，沿管壁加入KT-K₂C₂O₄ 2 mL(溶液為堿性時(shí)不要搖動(dòng))及硫酸溶液〔試劑(1)]3 mL充分搖動(dòng)混勻，使Cn₂O完全溶解;再于冷水浴中放5 min，并搖動(dòng)2次。然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[試劑(7)〕滴定，至淺黃色時(shí)，加入淀粉5滴～10滴為指示劑，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失為終點(diǎn)。

另取蒸餾水5mL(代替的待測(cè)液)按同祥的操作進(jìn)行空白標(biāo)定。由空白標(biāo)定與樣品測(cè)定所用毫升數(shù)之差，用已知量的標(biāo)準(zhǔn)塘溶液同樣進(jìn)行測(cè)定，可以校驗(yàn)表的數(shù)值。

5、結(jié)果計(jì)算

式中:m₁——查表39. 1得還原塘質(zhì)量,mg;

10^-3——將mg換算成g的系數(shù);

m——吸取的待測(cè)液中相當(dāng)?shù)臉悠焚|(zhì)量,g。

兩次平行測(cè)定結(jié)果允許相對(duì)偏差為5%。

（三）水溶性糖總量的測(cè)定

鹽酸水解-銅還原直接滴定法

1方法原理

植物水溶性糖包括葡萄糖、果糖和蔗糖。其中，蔗糖須經(jīng)稀HCL水解生成轉(zhuǎn)化糖(生成等量的葡萄糖和果糖)后與其它的還原糖一起測(cè)定，即為水溶性總糖。

2、儀器及設(shè)備

恒溫水電俗鍋。

3、試劑

(1)鹽酸溶液〔c(HCI)=6mol·L^-1]:濃鹽酸(HCI, p=1.19g·cm^-3，化學(xué)純)與水等體積混合;

(2)氫氧化鈉溶液[c(NaOH)=6mol·L^-1];240g氫氧化鈉(NaOH，化學(xué)純)溶于水中冷卻后稀釋至1L;

(3) 夏費(fèi)-索姆吉試劑與還原糖作用生成Cu₂O沉淀，將沉淀用H₂SO₄酸化時(shí)，Cu₂O即溶解成Cu⁺。而夏費(fèi)-素姆吉試劑中的KIO₃與KI在酸化時(shí)生成I₂:

KIO₃+5KI+3H₂SO =3K₂S0₄+3H₂0+3I₂

試劑中的KIO₃是定量加入的，所以生成的I₂也是一定量的。生成的I₂與Cu⁺發(fā)生氧化還原反應(yīng)，消耗一部分I₂。

溶液中與Cu⁺反應(yīng)后所剩余的I₂以淀粉為指示劑，用Na₂S₂O₃標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。

在測(cè)定同時(shí)做空白標(biāo)定，以水代替糖試液，由空白標(biāo)定消耗的Na₂S₂O₃毫升數(shù)減去實(shí)測(cè)待測(cè)液消耗的Na₂S₂O₃毫升數(shù)，查表39.1即得待測(cè)液中還原糧的毫克數(shù)。本方法適用于含糖少的蔬菜、牧草等樣品。

參考資料：土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法