醬腌菜，在GB2760-2014中的分類為腌漬的蔬菜，是我國(guó)傳統(tǒng)的消費(fèi)食品，也是廣大消費(fèi)者比較喜歡的食品之一。食品添加劑在醬腌菜的加工過(guò)程中已經(jīng)廣泛使用，最常用的添加劑為防腐劑（苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸）和甜味劑（糖精鈉、安賽蜜）。添加防腐劑能夠抑制產(chǎn)品中腐敗微生物的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)醬腌菜產(chǎn)品的保質(zhì)期；添加甜味劑則是為了增加產(chǎn)品的風(fēng)味口感。過(guò)量的食品添加劑會(huì)對(duì)人體健康造成危害，雖然GB2760-2014已經(jīng)規(guī)定了醬腌菜中這些添加劑的使用限量，但不排除個(gè)別生產(chǎn)企業(yè)為了延長(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期等目的而超量使用食品添加劑，因此有必要對(duì)醬腌菜中的添加劑含量進(jìn)行檢測(cè)。國(guó)標(biāo)方法GB5009.28-2016能夠同時(shí)檢測(cè)食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉含量，而且方法比較簡(jiǎn)單，適用于醬腌菜產(chǎn)品。

檢測(cè)脫氫乙酸的國(guó)標(biāo)方法有GB5009.121-2016、GB/T23377-2009，而檢測(cè)安賽蜜的國(guó)標(biāo)方法GB/T5009.140-2003僅適用于飲料產(chǎn)品的檢測(cè)，并不適用于醬腌菜產(chǎn)品。目前報(bào)道的安賽蜜檢測(cè)方法有離子色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、超高效液相色譜法和液相色譜法。離子色譜法的前處理比較繁瑣、液質(zhì)聯(lián)用法儀器比較昂貴、超高效液相法對(duì)色譜柱要求較高，而高效液相色譜儀為檢測(cè)機(jī)構(gòu)的基礎(chǔ)設(shè)備，又能滿足安賽蜜的檢測(cè)。因此擬采用高效液相色譜法測(cè)定醬腌菜中的安賽蜜，而脫氫乙酸也可以用高效液相色譜法測(cè)定，本研究建立了一種變波長(zhǎng)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醬腌菜中安賽蜜和脫氫乙酸的方法。該方法前處理簡(jiǎn)單、回收率高、精密度高，可用于醬腌菜中甜味劑安賽蜜和防腐劑脫氫乙酸的檢測(cè)。

一、材料與方法

1、材料與試劑

醬腌菜樣品（榨菜、雪菜、蘿卜干、乳黃瓜等）購(gòu)于無(wú)錫市各超市；安賽蜜、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司，純度大于99.5%；
甲醇（色譜純，迪馬科技）；氫氧化鈉、硫酸鋅、乙酸銨（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；微孔濾膜（0.45µm，上海安譜）；實(shí)驗(yàn)用超純水為實(shí)驗(yàn)室Mili-Q超純水機(jī)制備。

2、儀器與設(shè)備

1260型高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測(cè)器（DAD）（美國(guó)安捷倫公司）；IKA旋渦混勻器（廣州艾卡）；超聲波清洗機(jī)（無(wú)錫思耐德）；CT14D離心機(jī)（南京瑞蘭達(dá)）；ME204E分析天平、pH計(jì)（瑞士梅特勒公司）。

3、實(shí)驗(yàn)方法

（1）溶液配制

氫氧化鈉溶液：稱取20g氫氧化鈉，加水溶解并定容至1000mL；硫酸鋅溶液：稱取120g硫酸鋅，加水溶解并定容至1000mL；乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并定容至1000mL；安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品0.10g（精確至0.0001g），用水溶解并定容至100mL，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度為1000mg/L，貯存于4℃冰箱中。使用時(shí)根據(jù)需要用水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品0.10g（精確至0.0001g），用10mL氫氧化鈉溶液溶解并用水定容至100mL，標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度為1000mg/L，貯存于4℃冰箱中。使用時(shí)根據(jù)需要用水稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）樣品前處理

稱取2.50g經(jīng)粉碎、混勻的樣品至25mL比色管中，加入10mL水、5mL硫酸鋅溶液，渦旋混勻，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，用水定容至25mL，超聲提取10min，轉(zhuǎn)移至50mL離心管內(nèi)，5000r/min離心10min，上清液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾作為測(cè)定液，用高效液相色譜儀測(cè)定。

（3）高效液相色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXXDB-C18（250×4.6mm，5μm，美國(guó)安捷倫公司）；流動(dòng)相：90%0.02mol/L乙酸銨溶液+10%甲醇；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)程序：0～8min，226nm；8～12min，293nm。

二、結(jié)果與分析

1、樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

GB5009.121-2016樣品中脫氫乙酸是以水來(lái)提取的，考慮到安賽蜜（乙?；前匪徕洠┮兹苡谒?，所以以水來(lái)提取醬腌菜中的安賽蜜和脫氫乙酸。醬腌菜中含有少量的蛋白質(zhì)等成分，如果不去除將這些成分將會(huì)干擾測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)比較了兩類沉淀劑（亞鐵氰化鉀和乙酸鋅、氫氧化鈉和硫酸鋅）的沉淀分離效果。經(jīng)氫氧化鈉與硫酸鋅沉淀后，對(duì)樣品中的安賽蜜和脫氫乙酸的測(cè)定均無(wú)影響，加標(biāo)回收率接近100%；而經(jīng)亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀后，對(duì)樣品中安賽蜜的測(cè)定無(wú)影響，但對(duì)脫氫乙酸的測(cè)定有影響，加標(biāo)回收率僅為80%左右，可能是因?yàn)槊摎湟宜嵩谒械娜芙舛容^低，隨著蛋白質(zhì)等雜質(zhì)一起沉淀下來(lái)。因而，實(shí)驗(yàn)采用氫氧化鈉與硫酸鋅作為沉淀劑。

2、變波長(zhǎng)檢測(cè)條件的確定

將適當(dāng)濃度的安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別采用DAD進(jìn)行光譜掃描，以確定其最佳吸收波長(zhǎng)。由圖1可知，安賽蜜的最佳吸收波長(zhǎng)為226nm。由圖2可知，脫氫乙酸的最佳吸收波長(zhǎng)有兩個(gè)，分別為230nm和293nm?？紤]到對(duì)羥基苯甲酸酯類、苯甲酸、山梨酸等防腐劑在230nm處也有較大吸收，選擇293nm作為脫氫乙酸的特異檢測(cè)波長(zhǎng)。

在選定的色譜條件下，安賽蜜的出峰時(shí)間在6min左右，脫氫乙酸的出峰時(shí)間為10min左右，所以選定變波長(zhǎng)檢測(cè)程序?yàn)椋?～8min，226nm；8～12min，293nm。

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