北方偉業(yè)計量集團有限公司
目的 考察雞血藤斷面樹脂環(huán)紋數(shù)與其藥材品質(zhì)之間的相關(guān)性。方法 醇溶性浸出物含量按照《中國藥典:一部》(2015年版)附錄XA法測定;采用高效液相色譜法測定原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素、芒柄花素及染料木素的含量及建立高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜,用SPSS對其環(huán)紋數(shù)與醇溶性浸出物及5個化學成分進行相關(guān)性分析。結(jié)果 醇溶性浸出物的含量在3環(huán)左右時達到一個峰值,后隨著環(huán)紋數(shù)的增加,變化趨勢有所不同。不同樹脂環(huán)紋數(shù)藥材中原兒茶酸、兒茶素及表兒茶素的含量差異較大,而芒柄花素與染料木素的含量差異較小,其中兒茶素與表兒茶素、芒柄花素與染料木素在不同樹脂環(huán)紋藥材中的動態(tài)變化趨勢較為一致;除1環(huán)樣品外,同一植株不同環(huán)紋數(shù)的藥材樣品具有較高的相似度;環(huán)紋數(shù)與醇溶性浸出物及5個化學成分之間無顯著相關(guān)性。結(jié)論 各指標性成分的含量與樹脂環(huán)紋數(shù)之間沒有一定相關(guān)性,雞血藤橫切面的樹脂環(huán)紋數(shù)的多少不可以作為評判藥材質(zhì)量優(yōu)劣的直觀依據(jù),但以3環(huán)以上入藥為宜。
雞血藤為主產(chǎn)于廣東、廣西、云南等地的嶺南特色藥材,《中國藥典:一部》(2015年版)收載為豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn.的干燥藤莖,具有補血、活血、通絡(luò)之功效,用于治療月經(jīng)不調(diào)、血虛萎黃、麻木癱瘓、風濕痹痛等癥[1],為雞血藤片、金雞膠囊、婦科千金片、花紅片、正天丸等中成藥的組方原料,臨床應用廣泛,藥用需求量大。
雞血藤為多年生木質(zhì)藤莖類藥材,野生種群主要分布于山地林間。隨著經(jīng)濟林地的開發(fā),其群落生態(tài)環(huán)境遭受嚴重破壞,野生種群遭到掠奪性砍伐,種群恢復與更新速度緩慢,加上雞血藤使用量增加,國內(nèi)野生資源已滿足不了用藥需求,商品藥材多從越南、緬甸、柬埔寨等國進口。由于產(chǎn)地生態(tài)環(huán)境及植株生長年限的不同,藤莖的不同部位粗細不一,斷面的樹脂環(huán)紋數(shù)及色澤差異較大,藥材質(zhì)量參差不齊?,F(xiàn)行《中國藥典》收錄的雞血藤藥材性狀鑒定項下沒有規(guī)定斷面的樹脂環(huán)紋數(shù),要求醇溶性浸物含量不得少于8%,傳統(tǒng)入藥習慣以3環(huán)以上為宜。雞血藤斷面樹脂環(huán)紋數(shù)能否作為評判藥材內(nèi)在品質(zhì)的性狀指標,尚待進一步研究。據(jù)化學成分及藥理研究結(jié)果,學者們推測黃酮類成分可能是雞血藤對血液系統(tǒng)作用及抗腫廇等活性部位[2,3,4]。雞血藤總黃酮中的黃烷醇類成分,如兒茶素和表兒茶素含量較高;異黃酮類成分,如芒柄花素、染料木素等的含量較低[5,6,7,8]。因此本研究在醇溶性浸出物含量測定的基礎(chǔ)上,以黃酮類組分為檢測指標,開展不同樹脂環(huán)紋數(shù)雞血藤藥材品質(zhì)的分析與評價,以期為雞血藤入藥標準的性狀評判提供科學依據(jù)。
1.1 儀器
Waters2695高效液相色譜儀;Empower色譜工作站(美國Waters公司);Waters XTerra C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司);A560型紫外-可見光分光光度計(翱藝儀器有限公司);XR 205SM-DR型十萬分之一天平(瑞士Precisa公司);BP-110S型萬分之一天平(德國Sartorius公司);KQ3200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)。
1.2 試藥
無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯等均為分析純,水為蒸餾水,乙腈、磷酸、醋酸等為色譜純。原兒茶酸(批號:110809-200604)、兒茶素(批號:201102)、表兒茶素(批號:110878-200102)、芒柄花素(批號:111703-200501)、染料木素(批號:111704-200501)、大豆苷元(批號:20120426)、毛蕊異黃酮(批號:100618),均供含量測定用,中國藥品生物制品檢定研究院;異甘草素(純度≥98%,批號:140716),四川省維克奇生物科技有限公司。
選取梅州、從化、惠州3個不同居群的野生雞血藤,截取同一植株、同一條藤莖的不同粗度部位(分別具有1~9個樹脂環(huán)的藤莖),趁鮮切片干燥,粉碎,過40目篩,置密封袋中保存?zhèn)溆?,見?。本實驗所用材料經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學劉軍民教授鑒定為豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn.的藤莖。
按照《中國藥典:一部》(2015年版)附錄XA法測定。
參照劉軍民等[9]方法測定。
流動相A為0.1%磷酸,流動相B為乙腈,梯度洗脫(0~18 min,10%B;18~35 min,12%B;35~40 min,100%B;40~50 min,10%B);流速:1.0 m L·min-1;柱溫:25℃;檢測波長:290 nm(原兒茶酸)、280 nm(兒茶素、表兒茶素);進樣量:20μL。對照品及供試品溶液色譜圖見圖1。
取原兒茶酸、兒茶素和表兒茶素對照品適量,精密稱定,用50%甲醇配制成濃度分別為0.439、0.472、0.415 mg·m L-1的對照品貯備液。分別精密吸取100、200、200μL對照品貯備液至2 m L量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻,制成混合對照品溶液,備用。
取雞血藤粉末1.0 g,精密稱定,加甲醇60 m L,靜置30 min后超聲50 min,濾過,水浴蒸干濾液,殘渣用20 m L蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)置分液漏斗中;分別加乙酸乙酯20 m L,萃取3次,合并乙酸乙酯液,減壓回收至干;用少許50%甲醇溶解,定容至10 m L量瓶,搖勻,過0.45μm微孔濾膜,即得。
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