2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批中藥口服液，按供試品溶液制備法平行制備6份。按色譜條件進(jìn)樣30 μL，每個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。計(jì)算結(jié)果得相對(duì)峰面積RSD=6.00%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批中藥口服液(批號(hào)：20160721)，按供試品溶液制備法制備，考察其日內(nèi)精密度與日間精密度。分別于0、2、4、8、12、16、24 h內(nèi)及在0、12、24、36、48、60、72 h之內(nèi)分別精密量取供試液，按照色譜條件進(jìn)樣30 μL，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。計(jì)算結(jié)果得24 h內(nèi)平均含量2.27 μg/mL，相對(duì)平均含量RSD=8.14%，相對(duì)峰面積RSD=6.00%；72 h內(nèi)平均含量2.20 μg/mL，相對(duì)平均含量RSD=9.54%，相對(duì)峰面積RSD=8.58%，表明本方法在72 h內(nèi)重復(fù)性、穩(wěn)定性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 5.98 mg于5 mL容量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，得其濃度為1.196 mg/mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照液，根據(jù)前期研究算出供試液含量，特此進(jìn)行配制高、中、低3個(gè)不同標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為加樣標(biāo)液，分別取0.6、0.5、0.4 mL于10 mL容量瓶，加甲醇稀釋并定容至刻度，得其加樣標(biāo)液濃度分別為71.76、59.8、47.84 μg/mL。

精密量取同批次(批號(hào)：20160721)中藥口服液置于分液漏斗中，分為9份，每份樣品液為25 mL，分為高中低3組，每3份口服液為1組，各分別精密加入1 mL白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照液于分液漏斗中，混勻，按供試品溶液制備法制備，即得加樣回收供試液。按色譜條件進(jìn)樣，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，并計(jì)算含量與回收率。其平均回收率為98.04%，RSD=11.89%，表明回收相對(duì)較好(表2、表3)。計(jì)算公式為：測(cè)得加入量=測(cè)得總量-中藥口服液本身含有量，回收率=測(cè)得加入量/實(shí)際加入量×100%

2.7 耐用性試驗(yàn)

研究的變動(dòng)因素主要有：柱溫分別為20℃、25℃、30℃，流速0.8 mL/min， 色譜柱為ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6×250 mm， Agilent Technologies)；流速分別為0.6 mL/min、0.8 mL/min、1.0 mL/min， 柱溫25℃，色譜柱為ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6×250 mm， Agilent Technologies)；色譜柱分別為ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6×250 mm， Agilent Technologies)、PhenomenexGemini C18 110A(5 μm×250 mm×4.60 mm)、Vydac 218 TP C18(5 μm×250 mm×4.60 mm， Grace)，柱溫25℃，流速0.8 mL/min。

按以上變量色譜條件進(jìn)樣，其中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照液(73μg/mL)進(jìn)樣10 μL，20160721批供試液進(jìn)樣30 μL，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。當(dāng)柱溫改變，其他條件不變時(shí)，相對(duì)保留時(shí)間RSD=0.44%，相對(duì)含量RSD=4.15%；當(dāng)流速改變，其他條件不變時(shí)，相對(duì)保留時(shí)間RSD=1.25%，相對(duì)含量RSD=3.49%；當(dāng)換用不同型號(hào)色譜柱，其他條件不變時(shí)，相對(duì)保留時(shí)間RSD=0.64%，相對(duì)含量RSD=8.20%。從相對(duì)RSD值來看，不同型號(hào)色譜柱對(duì)保留時(shí)間差異最小，對(duì)其含量變化值相對(duì)較大；柱溫和流速的改變對(duì)其保留時(shí)間和含量變化差異均較小(表4～表6)。

因此，在測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量時(shí)柱溫應(yīng)保持在25℃，流速保持在0.8 mL/min， 選用Phenomenex Gemini C18 110A(5 μm×250 mm×4.60 mm)柱子進(jìn)行測(cè)定，其所得含量相對(duì)較高、穩(wěn)定且峰形較好，進(jìn)樣重復(fù)性好。

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