為建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定馬香苓口服液白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的方法，用色譜柱為ZORBAX SB-C18，以水和甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫，流速0.8 mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)223 nm，進(jìn)樣量30μL。結(jié)果顯示，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.57μg/mL～73.00μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，n=6)，精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.00%、8.58%和6.00%；加樣平均回收率為98.04%，RSD=11.89%，回收率良好。該方法準(zhǔn)確穩(wěn)定，簡(jiǎn)便可行，能夠很好的控制馬香苓口服液白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量，也為該制劑質(zhì)量控制提供了一種有效的方法。

馬香苓口服液是由廣藿香、白術(shù)、馬齒莧等制成的純中藥口服液，臨床主要用于治療病毒引起的仔豬腹瀉。研究表明，該制劑工藝穩(wěn)定可行，無(wú)刺激性，治療仔豬腹瀉總有效率達(dá)96%，治愈率達(dá)90%。為進(jìn)一步控制該制劑的質(zhì)量，便于臨床藥效學(xué)研究，故對(duì)該方劑做其定量的方法研究。白術(shù)具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎之功效；用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動(dòng)不安。在馬香苓口服液中作為臣藥，它的主要成分作用為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和蒼術(shù)酮等，該類(lèi)成分具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的作用，也是控制白術(shù)藥材質(zhì)量的主要指標(biāo)之一。據(jù)報(bào)道，其白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量可以作為評(píng)定中藥散劑、口服液水提工藝等指標(biāo)。因此，采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定本制劑中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量并做方法學(xué)研究，可以為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑

白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ(含量99.9%，20 mg， 批號(hào)：11978-201501)，中國(guó)食品藥品檢定研究院產(chǎn)品；馬香苓口服液，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所研制(批號(hào)20160324、20160616、20160623、20160625、20160704、20160705、20160712、20160714、20160717、20160721)；甲醇(色譜純，規(guī)格1 L，批號(hào)20161006)，天津川普偉業(yè)科技有限公司產(chǎn)品；水為超純水，石油醚(60℃～90℃，批號(hào)20160901)煙臺(tái)市雙雙化工有限公司產(chǎn)品；其余有機(jī)試劑均為分析純。

1.1.2 儀器與設(shè)備

DIONEX UItiMate 3000高效液相色譜儀，美國(guó)賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品；NewClassic MS 電子天平，梅特勒-托利多上海有限公司產(chǎn)品；Milli-Q型超純水機(jī)，美國(guó)Millipore公司產(chǎn)品；KQ 3200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18(5 μm×4.6 mm×250 mm， 美國(guó)Agilent Technologies)，以水和甲醇為流動(dòng)相梯度洗脫(表1)，流速0.8 mL/min， 柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)223 nm， 進(jìn)樣量30 μL。

1.2 方法

溶液制備：以甲醇和500 mL/L甲醇水溶液為空白溶液。精密稱(chēng)取白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ1.46 mg， 置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，密封，搖勻，即得濃度為0.73 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為0.073 mg/mL，作為白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照溶液。量取中藥口服液25 mL于125 mL分液漏斗，加石油醚(60℃～90℃)振搖提取4次，每次40 mL，收集上層石油醚有機(jī)溶液，水浴揮干(水浴鍋溫度90℃)，殘?jiān)?00 mL/L甲醇水溶液使其溶解，并定容至10 mL容量瓶，即得供試品溶液。取按處方比例并以同樣制備工藝的缺白術(shù)的陰性對(duì)照口服液，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液。

2 結(jié)果

2.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取空白、對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照溶液，過(guò)0.22 μm有機(jī)微孔濾頭于1 mL進(jìn)樣瓶中，密封，參照文獻(xiàn)并按色譜條件自動(dòng)進(jìn)樣測(cè)定，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，記錄色譜圖(圖1)，結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品溶液理論板數(shù)為13327；在與白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品溶液色譜峰對(duì)應(yīng)的位置上，供試品(26.063 min)與其對(duì)照品(26.419 min)保留時(shí)間一致，其理論塔板數(shù)為21420，且與其他組分分離度大于1.5；陰性對(duì)照溶液在對(duì)照品與供試液相應(yīng)的保留時(shí)間內(nèi)未檢出色譜峰，表明樣品中其他成分不干擾白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的測(cè)定。

2.2 線性關(guān)系考察

精密量取白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照液1 mL于2 mL容量瓶，加色譜甲醇定容至刻度，依次進(jìn)行倍比稀釋得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度分別為73.00、36.50、18.25、9.13、4.56、2.28μg/mL，按色譜條件自動(dòng)進(jìn)樣上述系列溶液各30 μL，每個(gè)濃度進(jìn)樣2次，記錄色譜圖并測(cè)定峰面積。以白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ峰面積(y)縱坐標(biāo)，檢測(cè)質(zhì)量濃度(x，μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸(圖2)，得回歸方程y=1.356 7x+0.857 6，R2=0.992，結(jié)果表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.57 μg/mL～73.00 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液，按色譜條件自動(dòng)進(jìn)樣30 μL，連續(xù)進(jìn)針6次，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。計(jì)算結(jié)果保留時(shí)間RSD=3.04%，相對(duì)峰面積RSD=2.00%，表明儀器精密度良好。

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