2.4.4 線性關系考察

用70%甲醇對貯備液進行逐級稀釋，得到2.024、20.240、50.600、101.200、151.800μg/m L的系列對照品溶液，分別精密吸取溶液各10μL，注入色譜儀進行測定，以對照品的進樣質(zhì)量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，得標準曲線方程為Y=35.919 X-4.386 4,r=1.000 0，結果表明，MMQ在2.024～151.800μg/m L線性關系良好。

2.4.5 定量限和檢測限

取對照品貯備溶液，逐步稀釋，按“2.4.1”項下色譜條件進樣，進樣量為10μL，信噪比（S/N）為10∶1，測得MMQ的定量限約為2.024μg/m L。信噪比（S/N）為3∶1時，MMQ的檢測限約為0.607μg/m L。

2.4.6 精密度試驗

選取高、中、低（101.200、50.600、20.240μg/m L)3個質(zhì)量濃度的對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件下同1 d內(nèi)連續(xù)進樣6次，測得MMQ峰面積的RSD分別為0.73%、0.95%、1.37%。連續(xù)測定3 d，每天進樣1次，記錄MMQ峰面積，測得MMQ峰面積的RSD分別為2.06%、1.61%、1.88%。結果顯示日內(nèi)、日間精密度均小于3%。表明日內(nèi)、日間精密度良好，儀器穩(wěn)定。

2.4.7 重復性試驗

取樣品粉末0.25 g(S5），按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.4.1”項下色譜條件進樣，進樣量為10μL，記錄MMQ的峰面積。采用外標一點法計算MMQ的含量，樣品中MMQ的質(zhì)量分數(shù)為5.28 mg/g,RSD為1.37%，表明此方法重復性好。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗

取樣品粉末0.25 g(S5），按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件分別于0、1、2、4、8、12、24 h進樣，進樣量為10μL，結果顯示MMQ峰面積的RSD為1.81%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的EGT粉末0.125 g(S5）精密稱定，按已測定的50%、100%、150%精密加入對照品溶液，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣，記錄峰面積，采用外標一點法計算加樣回收率。結果MMQ的平均加樣回收率為101.5%,RSD為1.46%。

2.4.1 0 定量測定

取7批EGT樣品，按“2.4.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣，經(jīng)HPLC測定后，結果顯示7批EGT(S8、S9因采集時間較久，未測定）的質(zhì)量分數(shù)范圍在0.13%～0.53%，見表1。

3 討論

3.1 指標成分的選擇

EGT為蒙古族習用藥材，目前無相關的質(zhì)控標準以及專屬性成分的研究，本研究通過MCI色譜、硅膠色譜、高效液相色譜等分離手段，得到專屬性成分，經(jīng)核磁鑒定為一種喹啉酮類生物堿（MMQ）。本實驗將EGT與其它4種近源樣品：大藍刺頭、硬葉藍刺頭、全緣藍刺頭和藍刺頭，進行薄層色譜和HPLC檢測比較，結果顯示大藍刺頭、硬葉藍刺頭、全緣藍刺頭不含有MMQ，在藍刺頭樣品中雖含有少量MMQ，但遠低于其檢測線。因此MMQ作為砂藍刺頭中含量較高且專屬性較強的成分，建立以其為指標成分定性定量方法，有一定的科學性與實用性，可以更好地評價EGT藥材的質(zhì)量。

3.2 薄層色譜鑒別

在薄層鑒別展開劑的考察中，發(fā)現(xiàn)酸對于薄層展開體系的影響較大，非酸體系下，斑點較少、分離度較差。篩選了多種顯色劑，包括磷鉬酸、碘化鉍鉀、碘、10%硫酸乙醇等，顯色效果均不佳，不顯色或者顯色不靈敏，最終定為以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶1∶1∶0.8）為展開劑，254 nm紫外燈下檢視熒光斑點即可。比較了不同廠家的薄層板：銀龍-HSGF254板、黃海-HSGF254板、德國MNSGF板和德國MNHSGF板，所建立的薄層方法在上述幾種板中均能獲得很好的展開效果，其中以德國MNHSGF板分離效果最好。

3.3 指紋圖譜建立

中藥色譜指紋圖譜能夠較為全面地反映中藥的整體質(zhì)量。本實驗建立指紋圖譜分析方法能很好地將EGT與同屬其他植物相區(qū)別。相似度分析評價中，S9（批號20120815）相似度僅為0.679，其他EGT樣品相似度均高于0.9，這提示EGT樣品陳置過久可能會影響其藥材質(zhì)量。這一發(fā)現(xiàn)為藥材市場中EGT藥材年限控制提供數(shù)據(jù)參考。不同來源的9批樣品指紋圖譜中的共有峰在數(shù)目以及相對保留時間上保持一致，但各共有峰相對峰面積有一定的差異，說明各批次藥材之間的質(zhì)量存在差異，推測可能與藥材產(chǎn)地、生長年限、采收期等因素有關。將EGT和其他種藍刺頭的指紋數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，主成分分析和聚類分析結果一致，均能實現(xiàn)EGT與同屬其他植物（藍刺頭、全緣葉藍刺、硬葉藍刺頭和大藍刺頭）的區(qū)別。在PCA中，16批樣品聚為2大類，S1～S9號樣品為不同批次EGT,S10～16號樣品為藍刺頭屬其他種樣品，其中S8和S9號樣品為2012年收集的樣品，雖經(jīng)放置多年，成分有所下降，但仍歸為EGT中。在聚類分析中，S8和S9號樣品處于同一組中；S14和S15號樣品為全緣藍刺頭也在同一組中，該結果與OPLS-DA結果一致。

3.4 含量測定

在建立MMQ的定量分析方法實驗中，進行了提取方法（超聲、加熱回流）、提取溶劑（純甲醇、70%甲醇、50%甲醇）、提取時間和提取次數(shù)的考察。最終確定的提取方便操作簡單、省時，對砂藍刺頭中MMQ提取率高?？疾炝艘译?水、乙腈-醋酸銨緩沖鹽水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液等流動相體系對液相色譜分離效果的影響。最終確定的含測方法重復性好，MMQ的分離度和含量測定RSD均符合檢測要求。另外，由于S8和S9藥材采集時間過久，為了不影響含量限度制定的準確性，未對這2批藥材進行含量測定。

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