玫瑰(RosarugosaThunb)屬薔薇目，薔薇科落葉灌木，主要包括重瓣玫瑰、大馬士革玫瑰、百葉玫瑰、香水月季等不同品種，主要分布于北半球，以保加利亞、摩洛哥、土耳其、法國(guó)、俄羅斯等國(guó)家，其中保加利亞玫瑰最為著名。我國(guó)玫瑰資源也相當(dāng)豐富，目前各地均有種植，其中以甘肅、北京、江蘇、云南等地為主。玫瑰花精油含量一般在0.1％以下，精油包含醇類(lèi)、烷烴類(lèi)、酯類(lèi)和萜烯類(lèi)等多種特殊活性成分，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于藥品和化妝品等領(lǐng)域，具有護(hù)膚美容、舒緩情緒、抗氧化活性、抑菌殺菌、抗血栓及改善血液循環(huán)、抗腫瘤等不同功效。

保留時(shí)間指數(shù)法是目前使用廣泛的分析定性方法，由于玫瑰精油中萜烯、醇類(lèi)等類(lèi)化合物存在同分異構(gòu)體或同系物，僅用質(zhì)譜庫(kù)檢索和匹配度定性會(huì)出現(xiàn)多種可能性，使化合物定性不準(zhǔn)確，借助保留指數(shù)定性可提高其定性準(zhǔn)確性。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)玫瑰精油提取工藝及香氣成分研究較多，但針對(duì)云南不同產(chǎn)地大馬士革玫瑰精油成分差異的研究未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，以云南玉溪峨山、曲靖沾益、昆明石林、大理云龍縣種植的大馬士革玫瑰花為研究對(duì)象，采用水蒸氣蒸餾法提取精油結(jié)合GC/MS對(duì)其成分進(jìn)行了對(duì)比分析，經(jīng)質(zhì)譜檢索后，匹配度結(jié)合保留指數(shù)對(duì)其定性，較好地鑒別了同分異構(gòu)體或同系物，避免了在定性過(guò)程中出現(xiàn)誤判，提高定性的準(zhǔn)確性。另外，通過(guò)對(duì)云南不同產(chǎn)地大馬士革玫瑰精油成分系統(tǒng)研究，為其在藥品和化妝品等領(lǐng)域應(yīng)用提供了指導(dǎo)。

一、材料與方法

1、材料與設(shè)備

（1）材料與試劑

試驗(yàn)樣品為2018年4月至6月采自云南玉溪峨山、曲靖沾益、昆明石林、大理云龍縣種植的玫瑰花，品種為“大馬士革玫瑰(Rosedamascene)”，從玫瑰植株中隨機(jī)選取花蕊剛露的玫瑰花，帶回實(shí)驗(yàn)室-20℃保鮮貯藏。

二氯甲烷、甲醇、乙醚、硫酸鈉、正己烷，GR級(jí)，由百靈威科技有限公司提供；正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀，Sigma-Aidrich公司提供。

（2）儀器與設(shè)備

Agilent7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀+自動(dòng)進(jìn)樣器(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；98-1-B調(diào)溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)；磨口揮發(fā)油提取儀(北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng))；萬(wàn)分之一電子天平(瑞士MettlerTloede公司)；5mL移液器(德國(guó)Eppendorf公司)。

2、方法

（1）玫瑰精油提取方法

參照文獻(xiàn)方法，將云南不同產(chǎn)地大馬士革玫瑰花，去除花托，將花瓣混合。稱(chēng)取約250g玫瑰花，置于圓底燒瓶中，加入1000mL蒸餾水浸泡12h，水蒸氣蒸餾法提取4h，乙醚萃取流出液，低溫除盡溶劑后無(wú)水硫酸鈉干燥過(guò)濾，獲得4種玫瑰精油備用，待進(jìn)行GC/MS分析。

(2)玫瑰精油成分分析

準(zhǔn)確稱(chēng)取玫瑰精油0.20g，用甲醇/二氯甲烷(體積比為1:4)混合溶液稀釋到10mL，用0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，直接進(jìn)GC/MS分析。色譜條件：DB-5ms毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，載氣為氦氣(純度為99.999％)，流速：1.0mL/min。升溫程序：初始溫度50℃，保持2min；以4℃/min的速率升溫至230℃，保持20min。進(jìn)樣口溫度：250℃，進(jìn)樣量：1.0μL，分流比：20:1，溶劑延遲6min。質(zhì)譜條件：電轟擊電離(EI)源；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電離能量：70eV；傳輸線(xiàn)溫度：280℃；掃描范圍(m/z)：40～450，質(zhì)譜檢索圖庫(kù)：NIST譜庫(kù)。

（3）定性方法

移取正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶液將其稀釋成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％溶液，按照Agilent7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀+自動(dòng)進(jìn)樣器(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；98-1-B調(diào)溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)；磨口揮發(fā)油提取儀(北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng))；萬(wàn)分之一電子天平(瑞士MettlerTloede公司)；5mL移液器(德國(guó)Eppendorf公司)這些儀器操作條件進(jìn)樣，求出正構(gòu)烷烴C₇～C₃₀保留時(shí)間，為下一步計(jì)算玫瑰精油中各成分保留指數(shù)作準(zhǔn)備。

根據(jù)VandenDool和Kratz的線(xiàn)性程序升溫的保留指數(shù)原理，利用自編軟件求得保留指數(shù)(KI)值：

式中：t_R為保留時(shí)間，下標(biāo)x表示待分析化合物，下標(biāo)n和n+1分別表示正構(gòu)烷烴的碳原子數(shù)。

玫瑰精油經(jīng)過(guò)GC/MS分析后，利用儀器自帶NIST質(zhì)譜庫(kù)對(duì)精油中化學(xué)成分進(jìn)行自動(dòng)檢索，然后通過(guò)自我開(kāi)發(fā)的保留指數(shù)軟件求出各成分保留指數(shù)，將軟件計(jì)算的保留指數(shù)與ESO精油數(shù)據(jù)庫(kù)中保留指數(shù)進(jìn)行比對(duì)(可接受誤差不超過(guò)3％)，對(duì)其進(jìn)行定性。

二、結(jié)果與分析

1、玫瑰精油成分分析

云南不同產(chǎn)地大馬士革玫瑰精油經(jīng)GC/MS檢測(cè)所得到總離子流色譜圖見(jiàn)圖1～4，其結(jié)果采用Nistll進(jìn)行檢索后結(jié)合ESO香精保留指數(shù)進(jìn)行對(duì)比對(duì)其定性，利用面積歸一化法計(jì)算得出玫瑰精油中各成分峰面積相對(duì)百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1所示。

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相關(guān)鏈接：硫酸鈉，GR級(jí)，二氯甲烷，乙醚