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(2)浸泡時間對靈芝發(fā)酵粉三萜得率的影響
由圖2可知,不同浸泡時間對靈芝發(fā)酵粉三萜化合物的提取得率有極顯著影響(p<0.01)。浸泡80min時三萜得率達到最高值0.6423mg/g,當浸泡時間在80min以下時,靈芝發(fā)酵粉三萜得率逐漸上升;當浸泡時間超過80min時,三萜得率在逐漸降低,因此,選擇最佳的浸泡時間為80min。
(3)料液比對靈芝發(fā)酵粉三萜得率的影響
由圖3可知,不同的料液比對靈芝發(fā)酵粉三萜化合物得率是有極顯著影響(p<0.01)。當料液比為1∶30時,三萜得率最高;料液比過低過高都會使三萜得率降低。分析其原因可能為一定量的靈芝發(fā)酵粉,加乙醇量過少時,不利于靈芝發(fā)酵粉中三萜化合物的溶出,使得95%乙醇中三萜化合物較少,當料液比增大時,靈芝發(fā)酵粉中的三萜化合物全部溶出,三萜得率較高,因此選擇的最佳料液比為1∶30。
(4)回流溫度對靈芝發(fā)酵粉三萜得率的影響
由圖4可知,回流溫度對靈芝發(fā)酵粉三萜得率有極顯著性影響(p<0.01)。當回流溫度為85℃時,三萜得率最高,為0.6168mg/g;當回流溫度高于85℃時,三萜得率反而逐漸會降低。究其原因為在一定溫度范圍內,溫度越高越有利于靈芝發(fā)酵粉中三萜化合物的溶出;當溫度過高時,三萜化合物的穩(wěn)定性受到影響,使其得率降低。故選擇回流溫度為85℃。
(5)回流時間對靈芝發(fā)酵粉三萜得率的影響
由圖5可以看出,回流時間對三萜得率的影響極顯著(p<0.01)?;亓?h時,三萜得率最高;回流超過3h,三萜得率反而會降低。因此,選擇最佳回流提取時間為3h。
(6)回流次數(shù)對靈芝發(fā)酵粉三萜得率的影響
由圖6可以看出,靈芝發(fā)酵粉三萜得率隨著回流次數(shù)的增加呈現(xiàn)上升趨勢,在回流次數(shù)為5次時三萜得率達到0.6849mg/g,但在提取3次以后,三萜得率提高不明顯,故從經(jīng)濟和時間成本考慮,選擇提取3次為最佳的提取次數(shù)。經(jīng)方差分析,該范圍內,回流次數(shù)對三萜得率的影響極顯著(p<0.01),故選擇回流次數(shù)為3次。
(7)響應面試驗結果
試驗選取料液比、回流時間、回流溫度作為考察因素,根據(jù)Box-Behnken試驗設計原理,以靈芝發(fā)酵粉三萜得率作為響應值,采用3因素3水平進行響應面試驗,結果見表2。
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