4、掃描電鏡形貌分析

用掃描電鏡觀察川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖的外表形貌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。a、b是川木瓜多糖放大5×10³倍和10⁴倍的形貌，c、d是羧甲基川木瓜多糖放大5×10³倍和10⁴倍的形貌。在相同的放大倍數(shù)下對比a、c及b、d，反應(yīng)前后呈現(xiàn)出不同的形貌。川木瓜多糖的外面光滑，表面基本無孔洞，而羧甲基川木瓜多糖外表疏松多孔，呈碎屑狀堆積，有明顯的溝槽結(jié)構(gòu)。上述結(jié)果表面羧甲基反應(yīng)改變了原多糖的形貌及結(jié)構(gòu)。

5、X-衍射分析

川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖的X-衍射分析譜圖如圖7所示。從圖7可知川木瓜多糖與羧甲基川木瓜多糖均為衍射寬峰，無衍射銳峰，可以認(rèn)定二者皆為無定型的結(jié)構(gòu)。川木瓜多糖在衍射角為12^o和21^o分別有較大衍射強(qiáng)度，而羧甲基川木瓜多糖在衍射角為12^o處的衍射峰消失，只剩12^o處的衍射峰，這是因?yàn)轸燃谆氪竟隙嗵侵衅茐牧嗽嗵欠肿渔溨械臍滏I。

6、不同取代度羧甲基川木瓜多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制作用

為了考察羧甲基川木瓜多糖對α-葡萄糖昔酶的抑制作用，從前面的單因素和正交試驗(yàn)中選取三組典型的呈梯度增長的1～3號羧甲基多糖。1號、2號、3號羧甲基川木瓜多糖的取代度分別為0.324、0.532、0.721。

不同取代度羧甲基川木瓜多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制作用如圖8所示。從圖8可知，羧甲基川木瓜多糖對、阿卡波糖和原川木多糖均對α-葡萄糖苷酶有一定抑制作用，且抑制率隨濃度的增大而增強(qiáng)，即呈量效關(guān)系。1～3號羧甲基多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制作用要強(qiáng)于原川木瓜多糖，說明羧甲基化能增強(qiáng)其抑酶活性。與陽性對照阿卡波糖相比，三種取代度的羧甲基多糖在低濃度范圍明顯弱于阿卡波糖，而中等取代度的多糖在濃度大于0.5mg·mL^-1后與阿卡波糖的抑制作用較接近。三種不同取代度的羧甲基多糖在濃度小于0.3mg·mL^-1時(shí)抑制作用沒有較大差異，當(dāng)濃度增大后中等取代度的羧甲基多糖有較好的抑制效果，而高取代度和低取代的抑制效果較相當(dāng)。取代度為0.532的羧甲基多糖當(dāng)濃度為0.9mg·mL^-1時(shí)抑制率可達(dá)88.6％。由試驗(yàn)結(jié)果可知，羧甲基川木瓜多糖的取代度對α-葡萄糖苷酶的抑制能力有一定的影響。多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，取代度對分子的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了較大的影響，從而影響其抑制α-葡萄糖苷酶的活性，但取代度的大小也不是影響活性的唯一因素，可能與多種效應(yīng)有關(guān)。

三、結(jié)論與討論

臨床上常用的口服降血糖藥物主要有硫脲類、雙胍類、苯甲酸衍生物類、噻唑烷二酮類和葡萄糖苷酶抑制劑類。α-葡萄糖苷酶抑制劑也已廣泛應(yīng)用于臨床，主要有奧利司他、阿卡波糖、拜糖平等，但此類化學(xué)類降糖藥物有一定副作用，因此尋找高效低副作用的口服α-葡萄糖苷酶抑制劑成為醫(yī)藥研究領(lǐng)域的一個(gè)重要方向。

本研究通過化學(xué)修飾制備得羧甲基木瓜多糖，以取代度為工藝指標(biāo)，通過單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化制備工藝，對羧甲基多糖分別進(jìn)行紅外光譜、掃描電鏡、x一衍射表征，再測試不同取代度的羧甲基川木瓜多糖對僅一葡萄糖苷酶的抑制作用。

試驗(yàn)結(jié)果表明，制備高取代度的羧甲基川木瓜多糖的最佳工藝條件為：NaOH濃度為4mol／L，氯乙酸用量為2g，反應(yīng)溫度為60℃、反應(yīng)時(shí)間3h，在該條件下取代度可達(dá)0.747。紅外光譜、掃描電鏡、X-衍射表征等表征手段均顯示川木瓜多糖已成功進(jìn)行了羧甲基化修飾。羧基甲基修飾后的川木瓜多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制作用強(qiáng)于原多糖，中等取代度的羧甲基川木瓜多糖抑酶活性比低、高取代度的作用要強(qiáng)。由此可知，取代度對α-葡萄糖苷酶的抑制能力有一定的影響，但并未找到最佳抑酶活性的取代度。取代度可能對多糖分子鏈構(gòu)象、分子間距、分子量有較大影響，從而影響活性，其構(gòu)效關(guān)系有待研究。

后續(xù)研究可以酶活抑制率作為指標(biāo)，深入探討羧甲基方法、取代度等因素對抑制作用的影響，篩選出對α-葡萄糖苷酶具有較好抑制作用的羧甲基多糖。羧甲基川木瓜多糖對α-葡萄糖苷酶的抑制作用為體外試驗(yàn)，其降血糖活性還需要體內(nèi)降血糖模來一進(jìn)步驗(yàn)證。

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