3.2奶粉樣品中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)分析

3.2.1樣品中沙門(mén)氏菌的平板分離

樣品經(jīng)２次增菌后，劃線接種于BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板和沙門(mén)氏菌顯色平板上進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果見(jiàn)表2：W樣品在BS、XLD以及沙門(mén)氏菌顯色3種平板上均出現(xiàn)可疑沙門(mén)氏菌菌落，其中在BS和XLD平板上可見(jiàn)典型沙門(mén)氏菌落③和④，而在沙門(mén)氏菌顯色平板上均為可疑菌落?、俸廷?個(gè)菌落鑒定。Q樣品在BS平板無(wú)可疑菌落，而在XLD和沙門(mén)氏菌顯色平板上無(wú)典型菌落，可能是非典型菌落或干擾菌。

沙門(mén)氏菌屬能產(chǎn)生特異性較強(qiáng)的辛酯酶，具有辛酯酶活性的干擾菌有銅綠假單胞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌和蜂窩哈夫尼亞菌，這些菌在沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上會(huì)生成紫紅色干擾菌。腸炎沙門(mén)菌雙相亞利桑那亞種在沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)因培養(yǎng)基廠家不同而不同墨綠到藍(lán)色菌落，這容易與其它腸桿菌混淆。楊云斌比較了沙門(mén)氏菌和干擾菌在3種分離平板上的特點(diǎn)，見(jiàn)表3。從表２和表３可以發(fā)現(xiàn)，在BS平板上，典型沙門(mén)氏菌落和沙門(mén)氏菌主要干擾菌的菌落特點(diǎn)容易區(qū)分開(kāi)來(lái)，而在其他2種平板上則容易混淆。

3.2.2奶粉樣品中沙門(mén)氏菌生化和血清鑒定結(jié)果

由于弗氏檸檬酸桿菌和大腸埃希氏菌的許多抗原與沙門(mén)氏菌的抗原完全或部分相同，且這2種菌與沙門(mén)氏菌屬O多價(jià)A-F診斷血清會(huì)發(fā)生交叉凝集反應(yīng)，因此血清鑒定陽(yáng)性者必須進(jìn)一步做其它生化鑒定。通常情況，做TSI和血清學(xué)鑒定后，只對(duì)血清鑒定陽(yáng)性菌落進(jìn)一步做后續(xù)生化鑒定。為慎重起見(jiàn)，本次對(duì)疑似陰性的考核樣品的菌落仍然做了后續(xù)生化鑒定。

W和Q樣品平板分離出的6種可疑菌落TSI和血清學(xué)鑒定結(jié)果見(jiàn)表４。表4表明，W樣品在沙門(mén)氏菌顯色平板上分離到的紫紅色可疑菌落中2個(gè)菌落(菌落①和②)為血清學(xué)鑒定陰性，而在BS和XLD 2個(gè)平板上挑出的２個(gè)可疑菌落(菌落③和④)血清學(xué)鑒定陽(yáng)性，且生化鑒定符合，判定為沙門(mén)氏菌檢出，菌落①②③和④屬于同一樣品，因而①②無(wú)須生化再鑒定。Q樣品在XLD平板上的可疑菌落(菌落⑤和⑥)經(jīng)生化和血清鑒定，結(jié)果為非沙門(mén)氏菌。在能力考核中，檢出陽(yáng)性的判斷比陰性樣品的要容易，而對(duì)于諸多形態(tài)可疑菌落的陰性樣品，需對(duì)可疑菌落逐個(gè)鑒定，否則易犯錯(cuò)。

3.3奶粉樣品中阪崎腸桿菌的檢測(cè)分析

3.3.1平板分離

阪崎腸桿菌在歷史上一直被誤認(rèn)為是黃色陰溝腸桿菌，因此兩者互為干擾菌；阪崎腸桿菌顯色平板是利用其α-葡萄糖苷酶陽(yáng)性，在TSA中加入XαGlc(5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷酸)，α-葡萄糖苷酶作用于XαGlc而使阪崎腸桿菌生成特異性藍(lán)綠色菌落。樣品V在阪崎腸桿菌顯色平板出現(xiàn)可疑藍(lán)綠色菌落(表５)，于是挑取10個(gè)可疑菌落于1 mL無(wú)菌生理鹽水中，稀釋混勻后在TSA劃線分離培養(yǎng)，借助放大鏡觀察菌落，結(jié)果出現(xiàn)2種菌落，有黃色菌落和淡黃粉色菌落，再進(jìn)一步做生化鑒定。樣品G無(wú)阪崎腸桿菌可疑菌落，判為未檢出。挑取可疑菌落是關(guān)鍵步驟，挑取的位置和個(gè)數(shù)盡可能增大捕捉概率，如果僥幸調(diào)取2~3個(gè)可疑菌落，則可能會(huì)漏檢。

3.3.2生化鑒定

對(duì)樣品V在TSA平板上生長(zhǎng)的2種菌落⑦和⑧進(jìn)行生化鑒定，如表6，結(jié)果表明，可疑菌落⑦產(chǎn)黃色素，氧化酶、山梨醇、賴(lài)氨酸陰性，精氨酸雙水解酶、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、苦杏仁甙陽(yáng)性，鑒定結(jié)果符合阪崎腸桿菌生化特征。菌落⑧的生化鑒定結(jié)果不符合阪崎腸桿菌生化特征。由此可見(jiàn)，α-葡萄糖苷酶陽(yáng)性是阪崎腸桿菌的屬性，但是并非唯一；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基對(duì)阪崎腸桿菌的特異性是有限的，這與吳清平等的論述一致。當(dāng)在顯色平板上發(fā)現(xiàn)有可疑菌落，若鑒定為陰性時(shí)，需用全排除法，否則容易出現(xiàn)假陰性。

3.4奶粉樣品中沙門(mén)氏菌和阪崎腸桿菌檢測(cè)結(jié)果

W樣品檢出沙門(mén)氏菌，Q樣品未檢出沙門(mén)氏菌；V樣品檢出阪崎腸桿菌，G樣品未檢出阪崎腸桿菌，檢測(cè)結(jié)果滿(mǎn)意。

4結(jié)論和討論

在分離鑒別沙門(mén)氏菌時(shí)，BS平板具有重要的決定性作用，而其它2種平板上容易受干擾菌的影響，只能起輔助鑒別作用。這一結(jié)論與與楊云斌等的“沙門(mén)顯色培養(yǎng)基的分離鑒定效果最好”的結(jié)論不同，但與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-2016的技術(shù)規(guī)范主旨一致。

辛酯酶是沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)選擇設(shè)計(jì)的主要依據(jù)，其對(duì)沙門(mén)氏菌的靈敏度和特異度分別為100%和84.09%。本次實(shí)驗(yàn)中，W樣品在顯色平板上明顯都是沙門(mén)氏菌可疑菌落，挑選2個(gè)菌落實(shí)驗(yàn)但是血清鑒定結(jié)果卻是陰性，原因是顯示辛酯酶陽(yáng)性菌除了多數(shù)沙門(mén)氏菌外，還有銅綠假單胞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、熒光假單孢菌和惡臭假單孢菌等。

此外，在此次實(shí)驗(yàn)中本實(shí)驗(yàn)室還積累了兩點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)：第一，在準(zhǔn)備過(guò)程中，有意設(shè)計(jì)了兩種標(biāo)準(zhǔn)菌交互培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)，主要目的為積累知識(shí)，增強(qiáng)辨別能力。第二，能力驗(yàn)證樣品不同于普通食品樣，應(yīng)試過(guò)程對(duì)于典型菌，一般操作者不容易犯錯(cuò)，確證相對(duì)容易；但對(duì)于非典型菌，則需要耐心做出后續(xù)鑒定，而不能輕易下結(jié)論；對(duì)于初篩是疑似陽(yáng)性者后續(xù)鑒定為陰性時(shí)，則需增多可疑菌的鑒定，必要時(shí)用全排除法。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系

相關(guān)鏈接：沙門(mén)氏菌，血清，葡萄糖苷酶，銅綠假單胞菌