②料液比對苦養(yǎng)蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取的影響

隨著液料比的增大，苦養(yǎng)蛋白和黃酮類化合物得率也隨之增大。當(dāng)液料比達(dá)到30∶mL/g時，苦蕎蛋白得率達(dá)到最大值為8.04％，黃酮類化合物得率為1.18％。隨著液料比的繼續(xù)增加，黃酮得率逐漸增大且趨勢平緩，而苦蕎蛋白得率逐漸減小。由于液料比過大使提取液濃度過低，在酸沉過程中溶液中的蛋白和黃酮類化合物易流失在上清液中，甚至導(dǎo)致酸不沉析的現(xiàn)象產(chǎn)生。從耗能等綜合角度考慮，液料比以30∶mL/g為宜。

③pH對苦養(yǎng)蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取的影響

在堿性條件下超聲同步提取苦蕎蛋白和黃酮類物質(zhì)，隨著pH的增大二者的得率也隨之增大，說明堿性條件有利于苦養(yǎng)蛋白和黃酮類物質(zhì)的溶出。當(dāng)pH為9時，蛋白得率達(dá)到最大值7.89％，黃酮得率最大值1.12％。但隨著pH的繼續(xù)增大兩者的得率均呈下降趨勢。這是因為苦蕎蛋白在強(qiáng)堿環(huán)境下會產(chǎn)生水解、脫氨以及脫羧等反應(yīng)，影響理化性質(zhì)，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)強(qiáng)烈變性。pH過高也會影響產(chǎn)品色澤以及出現(xiàn)其他副作用，在酸沉過程中也會使溶液中鹽分增加，發(fā)生鹽溶現(xiàn)象。考慮到生產(chǎn)成本以及環(huán)保等因素，選用pH為9的溶液進(jìn)行苦蕎蛋白和黃酮類物質(zhì)的最佳提取條件。

④時間對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲輔助同步提取的影響

隨著超聲時間的延長，苦蕎中蛋白和黃酮類物質(zhì)的得率隨之增加。表明在一定的時間范圍內(nèi)，超聲作用可使細(xì)胞破裂進(jìn)而促進(jìn)蛋白的釋放，進(jìn)而增加蛋白得率。當(dāng)超聲時間達(dá)到40min時苦蕎蛋白的得率達(dá)到最大值，隨后呈下降趨勢，因為長時間的高溫及強(qiáng)堿作用會使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞，溶解度降低。黃酮類物質(zhì)得率一直為增長趨勢，時間達(dá)到60min后增長趨勢緩慢，但時間過長會導(dǎo)致雜質(zhì)的溶出。故選擇40min為最佳提取條件。

⑤溫度對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲輔助同步提取的影響

當(dāng)超聲溫度達(dá)到65℃時，苦蕎蛋白和黃酮類化合物得率均達(dá)到最大值，分別為7.97％和1.19％。隨著溫度繼續(xù)升高，會使蛋白結(jié)構(gòu)破壞甚至變性，雖然溫度的升高促使分子解吸，加快擴(kuò)散速度，從而提高黃酮得率，但過高的溫度容易使黃酮被氧化，也會導(dǎo)致黃酮類化合物的某些部位位置發(fā)生變化，母核被破壞，使其得率呈下降趨勢。因此提取溫度為65℃最為適宜。

（2）響應(yīng)面優(yōu)化試驗

以Box—Benhnken的中心組合試驗設(shè)計原理為依據(jù)，根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇粒度（A）、pH（B）、溫度（C）進(jìn)行三因素三水平響應(yīng)面設(shè)計同步提取苦蕎中蕎麥蛋白和黃酮類物質(zhì)。因素編碼水平表見表2，試驗設(shè)計及結(jié)果見表3。

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