2.3選擇樣品提取方法

對比多次提取樣品的方法，前處理條件為粉碎樣品，將5g樣品放入具塞錐形瓶中，加入20 mL體積比1∶1的水-乙醇溶液，含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸，10 min超聲波振蕩，然后過濾。使用20 mL上述提取液再次提取殘渣，過濾，合并濾液。定容至5 mL。使用氮吹儀上濃縮，使用濾膜0.45μm過濾，加入乙醇，減少干擾，促進(jìn)水溶性蛋白的沉淀，加入甲酸，提升三聚氰胺的萃取率。使用MS/MS方法，可直接上機(jī)分析樣品提取液。

2.4線性范圍與檢出限

稀釋三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液，使用流動相操作，形成0.5、0.25、0.1、0.05、0.01 m，相關(guān)系數(shù)0.9993。回歸方程A=61956ρ+49 958。線性關(guān)系處于0.01～0.5 mg/L，呈現(xiàn)良好的范圍。0.01 mg/L為三聚氰胺檢出限。處理樣品，0.01 mg/kg為定量下限。

2.5精密度與回收率實驗

將飼料樣品分成3組，每組3份。每組樣品加入三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別為0.5、0.1、0.01 mg/kg。處理后檢測每個樣品。每個樣品檢測3次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.6%～5.1%?；厥章蕿?2%～99%。

2.6實際樣品測定檢測

樣品為100多個飼料和食品添加劑。顯示三聚氰胺含量0.11×104～4.5×104 mg/kg。部分樣品中含有三聚氰胺，檢測結(jié)果如下表。對于樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的離子流色譜圖，如下圖。

3討論

三聚氰胺也稱為三聚氰酰胺、氰脲酰胺、密胺、三胺。無味，白色粉末。分子量126.12。分子式C3N6H6。屬于三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物。三聚氰胺的相對密度為1570 kg/m3。354℃分解，極微溶于熱乙醇，微溶于冷水，能溶于熱乙二醇、乙酸、甲醇等。不溶于苯、乙醚等。在微堿性或中性環(huán)境下，三聚氰胺與甲酵縮合（劉韜等，2017）。三聚氰胺與草酸、鹽酸、乙酸等都能形成鹽，在微酸性環(huán)境下，三聚氰胺與經(jīng)甲基的衍生物生成樹脂產(chǎn)物。三聚氰胺的主要用途是生產(chǎn)阻燃劑、膠水、塑料等，是三聚氰胺甲醛樹脂的原料。部分國家用于制造化肥。在食品和飼料中添加三聚氰胺可冒充蛋白（呂麗卿等，2017）。且凱氏定氮法不能檢出三聚氰胺，被一些不法分子利用。從源頭上監(jiān)測三聚氰胺是保障人民群眾生命安全、畜牧業(yè)健康發(fā)展的重要方法（孟繁佳等，2020）。

三聚氰胺在動物體內(nèi)沒有任何代謝變化。以原型或同系物形式經(jīng)腎臟排泄。有研究表明，成年雄性大鼠經(jīng)口給藥三聚氰胺，顯示通過尿液排泄大約90%的給藥劑量。相比血液中的含量，腎臟和膀胱更高，最高的是膀胱。尿液中的消除半衰期為3 h，血液為2.7 h（劉發(fā)全等，2019）。有給斷奶仔豬服用三聚氰胺化合物，結(jié)果顯示，血漿消除半衰期為4.04 h。三聚氰胺容易經(jīng)腎臟排泄，對哺乳動物來說，三聚氰胺是低毒、微毒類化學(xué)物質(zhì)。經(jīng)口給予大鼠三聚氰胺，致死量為3.16 g/kg。經(jīng)口給予小鼠三聚氰胺，致死量為4.55 g/kg。大鼠拌料口服14 d無不良反應(yīng)的劑量是417 mg/（kg·d）。小鼠拌料口服13周1600 mg/（kg·d）為無不良反應(yīng)劑量。大鼠吸入80～1130 mg/m3，每周6次，每日2次，持續(xù)超過4個月開始出現(xiàn)腎功能紊亂、中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，體重增加遲滯，對腎臟造成損傷。三聚氰胺會引起試驗動物腎衰竭。長期攝入三聚氰胺會導(dǎo)致腎部、膀胱出現(xiàn)結(jié)石，損害泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)，進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。美國食品藥品管理局研究認(rèn)為，同時含有三聚氰酸、三聚氰胺會威脅嬰兒健康（商軍等，2019）。因此規(guī)定配方奶粉三聚氰胺含量不能高于百萬分之一，同時不得含有其他相近的化學(xué)品。

飼料和食品中違法添加三聚氰胺會危害畜牧業(yè)的發(fā)展和人民群眾身體健康。飼料和食品中添加三聚氰胺會造成營養(yǎng)虛高現(xiàn)象。使用添加三聚氰胺的飼料會降低畜禽生產(chǎn)水平，且長期使用容易導(dǎo)致動物中毒、結(jié)石等，給養(yǎng)殖戶造成巨大損失（范艷等，2019）。要從畜禽養(yǎng)殖源頭上檢測三聚氰胺。保障畜禽產(chǎn)品安全，為農(nóng)業(yè)執(zhí)法提供依據(jù)。目前還沒有國家標(biāo)準(zhǔn)的三聚氰胺檢測方法。農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是用氣質(zhì)聯(lián)用法確診，用高效液相色譜法檢測。高效液相色譜法應(yīng)用廣泛，基本上所有的化合物都可使用。氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）需要衍生，影響效果和準(zhǔn)確性。高效液相色譜-質(zhì)譜法抗干擾能力強(qiáng)，并且能夠確定性、定量，靈敏度高，準(zhǔn)確性高。

4總結(jié)

綜上所述，本文研究采用高效液相色譜-質(zhì)譜法檢測飼料和食品添加劑中的三聚氰胺。回收率為82%～99%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差1.6%～5.1%，靈敏度和準(zhǔn)確度較好。高效液相色譜-質(zhì)譜法處理簡單，操作性強(qiáng)，有利于三聚氰胺的檢測。

聲明：本文所用圖片、文字來源《中國飼料》2020年第18期，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請與本網(wǎng)聯(lián)系

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