衰老是生物體在正常狀況下機體各組織器官功能隨時間的流逝而減退，自身應(yīng)急免疫能力下降，內(nèi)環(huán)境產(chǎn)生不穩(wěn)定因素，各結(jié)構(gòu)組分發(fā)生不可抗拒的退行變化現(xiàn)象，是生物必然的一種過程，是多種因素共同作用的結(jié)果。自由基損傷學(xué)說是解釋衰老的理論之一，認(rèn)為自由基和活性氧在機體內(nèi)的堆積會導(dǎo)致細(xì)胞和組織的損傷，造成氧化應(yīng)激并引起衰老和不正常的細(xì)胞死亡。生物體在衰老過程中機體氧化應(yīng)激水平降低，代謝產(chǎn)物丙二醛增多，抗氧化酶活力減弱，機體產(chǎn)生和清除自由基的平衡被破壞，使自由基堆積，加速衰老。

金針菇學(xué)名毛柄金錢菌，屬真菌門、口蘑科、金針菇屬真菌，營養(yǎng)價值高，含有多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮、萜類、核苷酸、纖維素、維生素和礦物質(zhì)等成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)、降低膽固醇含量、保肝護肝、延緩衰老等多種生理活性，是一種理想的保健食品。金針菇每年產(chǎn)量可達400多萬噸，一般在采摘銷售前，要做切根處理，產(chǎn)生的廢菇柄每年可達30～35萬噸。人們把這些廢菇柄一般直接扔掉或用作動物飼料，這樣不但對環(huán)境產(chǎn)生了污染同時也造成了資源浪費?，F(xiàn)有資料表明，金針菇廢菇柄蛋白質(zhì)含量為17.02g/100gDW，氨基酸種類齊全，含有人體必需的18種氨基酸，其中總氨基酸含量為59.81％，必需氨基酸含量占總氨基酸量的40.27％。金針菇廢菇柄多糖提取率可達11.09％，核苷酸提取率可達1.47％。而目前利用金針菇廢菇柄進行深加工的研究還不夠深入，對其深加工和商品化處理方面尚未得到充分重視。

蛹擬青霉是蛹蟲草的無性型，含有大量的蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸等活性物質(zhì)，具有增強免疫力、抗氧化、延緩衰老等生理活性。蛹擬青霉具有很好的生物轉(zhuǎn)化能力可以將發(fā)酵基質(zhì)進行轉(zhuǎn)化，并賦予發(fā)酵菌質(zhì)新的代謝產(chǎn)物，增強其生物活性。具有活性成分的藥性基質(zhì)被藥用真菌發(fā)酵，它既能提供真菌所需營養(yǎng)大量生長菌體，同時又能因真菌的酶而改變其原來的組織成分，它具有雙向性，可以在生長發(fā)育過程中進行一系列復(fù)雜的分解合成代謝，產(chǎn)生新的物質(zhì)和新的功能。閏梅霞、賀曉玉分別研究了蛹蟲草發(fā)酵人參和五味子藥渣，其研究結(jié)果表明，其發(fā)酵產(chǎn)物中多糖、蛋白質(zhì)、總皂苷和蟲草素含量均得到提高。本研究以蛹擬青霉對金針菇廢菇柄的發(fā)酵物為材料，測定其對D一半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠血清和主要器官的谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶、總抗氧化能力、過氧化氫酶活性及丙二醛含量，探討其對抗氧化應(yīng)激損傷的影響，評估其抗氧化、抗衰老效果，為金針菇廢菇柄的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

一、材料與方法

1、動物、材料與試劑

金針菇廢菇柄，徐州康盛食用菌有限公司提供。

雄性ICR小鼠，體重18～22g，購于徐州醫(yī)科大學(xué)，實驗動物使用許可證號：SYXK（蘇）2016-0028。

金針菇廢菇柄發(fā)酵物由江蘇省食品資源開發(fā)與質(zhì)量安全重點建設(shè)實驗室通過發(fā)酵制備而得，其多糖含量為678.57μg/g，蟲草素含量為90.9μg/g。
D一半乳糖，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；冰醋酸，天津市福晨化學(xué)試劑廠；谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH—Px）試劑盒（20190306）、超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）試劑盒（20190302）、總抗氧化能力（Totalantioxidantcapacity，T-AOC）試劑盒（20190225）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒（20190310）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）試劑盒（20190316），南京建成生物工程研究所。

2、儀器與設(shè)備

FA一210N型電子天平，上海精密儀器有限公司；TU—1810型紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；SK—l型快速混勻器，金壇市成輝儀器；HH一4數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司；DL-5型低速離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠；3K15臺式高速冷凍離心機，德國Sigma公司；SpectraMaxiD3型多功能酶標(biāo)儀，美國MolecularDevices公司。

3、實驗方法

（1）小鼠分組

將體重（20±2）g的ICR雄性小鼠隨機分成6組：空白對照組（BC）；金針菇廢菇柄發(fā)酵物組：低劑量組（LD）、中劑量組（MD）、高劑量組（HD）；D一半乳糖模型組（NC）；金針菇廢菇柄對照組（FC），每組10只。

（2）試驗給藥處理

空白對照（BC）組小鼠皮下注射300mg/（kg·bw·d）無菌生理鹽水，其他各組小鼠均按質(zhì)量分?jǐn)?shù)4％的D一半乳糖生理鹽水（500mg/kg·bw·d），均連續(xù)注射6周。注射D一半乳糖同時，低劑量（LD）組每天灌胃10mL/（kg·bw）金針菇廢菇柄發(fā)酵物50mg/（kg·bw）、中劑量（MD）組灌胃相同體積的金針菇廢菇柄發(fā)酵物150mg/（kg·bw）、高劑量（HD）組灌胃相同體積的金針菇廢菇柄發(fā)酵物350mg/（kg·bw）；金針菇廢菇柄對照（FC）組灌胃相同體積的金針菇廢菇柄粉150mg/（kg·bw）；空白對照（BC）組與模型對照（NC）組灌胃相同體積的生理鹽水。灌胃用的金針菇廢菇柄發(fā)酵物和金針菇廢菇柄經(jīng)干燥粉碎后，過60目篩子，并按照灌胃劑量濃度用生理鹽水制備而成。每組小鼠分裝在不同籠子飼養(yǎng)在同一個飼養(yǎng)室，各組小鼠飼料與水保證充足，飼養(yǎng)室溫度控制在（20±2）℃，相對濕度控制在（50±10）％。

（3）試驗組織處理

小鼠最后一次灌胃后，均禁食12h，采血前1h禁水，從小鼠眼部取血，立即4000r/min離心15min取血清，待測。

采血后立即脫頸椎處死小鼠，分別完整取出小鼠肝臟、腦、心臟，加人4℃預(yù)冷生理鹽水制成10％的組織勻漿，低溫離心機4℃、3000r/min離心10～15min，取上清液，加入生理鹽水配制成實驗所需的各濃度，待測。

（4）生化指標(biāo)測定

測定GSH-Px、SOD、T-AOC、CAT活性及MDA生成量指標(biāo)的具體操作方法，按照試劑盒說明書上的方法進行操作，具體計算公式如下：
①GSH—PX測定：測定樣品OD₄₁₂值，并按公式計算：

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相關(guān)鏈接：氧化酶，蟲草素，谷胱甘肽，過氧化氫