結(jié)果

2.1D-纈氨酸細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8法通過(guò)評(píng)估不同濃度D-纈氨酸對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響，以研究D-纈氨酸對(duì)L929細(xì)胞的細(xì)胞毒性?結(jié)果如圖1：培養(yǎng)第1?3? 5天與對(duì)照組相比，D-纈氨酸在濃度為50mmol/L和75mmol/L時(shí)對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響無(wú)顯著性差異(P>0.05)；D-纈氨酸在濃度為100mmol/L，125mmol/L和150mmol/L時(shí)對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響具有顯著性差異(P<0.05)?濃度為50mmol/L和75mmol/L和D-纈氨酸被用于進(jìn)一步研究?

2.2D-纈氨酸和L-纈氨酸對(duì)牙齦卟啉單胞菌活性的影響

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定不同濃度的D-纈氨酸和L-纈氨酸與牙齦卟啉單胞菌共培養(yǎng)后的生長(zhǎng)曲線，評(píng)估D-纈氨酸和L-纈氨酸對(duì)牙齦卟啉單胞菌生長(zhǎng)的影響?結(jié)果如圖2：空白對(duì)照組在培養(yǎng)72h后濁度達(dá)到峰值，并持續(xù)12h后濁度開(kāi)始下降，在96~144h內(nèi)濁度保持?與對(duì)照組相比：加入L-纈氨酸組(50mmol/L，75mmol/L)，生長(zhǎng)曲線峰值在培養(yǎng)60h后出現(xiàn)，隨即濁度開(kāi)始下降，在96~144h內(nèi)濁度保持與對(duì)照組無(wú)差異；加入50mmol/LD-纈氨酸組，生長(zhǎng)曲線在60h前細(xì)菌濁度未見(jiàn)明顯增長(zhǎng)，60h后開(kāi)始增加，并在108~144h保持，持續(xù)濁度與對(duì)照組無(wú)差異；加入75mmol/LD-纈氨酸組，細(xì)菌濁度在培養(yǎng)144h內(nèi)無(wú)增長(zhǎng)?加入D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組實(shí)驗(yàn)結(jié)果等同于僅加入D-纈氨酸組?

2.3生物膜形成

實(shí)驗(yàn)結(jié)晶紫染色分析結(jié)果如圖3，生物膜形成抑制實(shí)驗(yàn)：共培養(yǎng)3d后，D-纈氨酸組(50mmol/L，75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(50mmol/L，75mmol/L)與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P<0.05)?L-纈氨酸(50mmol/L，75mmol/L)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?共培養(yǎng)5d后，D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P<0.05)；其他組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?生物膜分散實(shí)驗(yàn)：D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P<0.05)；其他組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?

2.4D-纈氨酸和L-纈氨酸對(duì)牙齦卟啉單胞菌胞外多糖的影響

標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4a，胞外多糖分析結(jié)果如圖4b?生物膜形成抑制實(shí)驗(yàn)：共培養(yǎng)3d后，D-纈氨酸組(50mmol/L，75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(50mmol/L，75mmol/L)與對(duì)照組相比胞外多糖含量明顯較少，并具有顯著性差異(P<0.05)?L-纈氨酸(50mmol/L，75mmol/L)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?共培養(yǎng)5d后，D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)與對(duì)照組相比胞外多糖量明顯低于對(duì)照組，并具有顯著性差異(P<0.05)；其他組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?生物膜分散實(shí)驗(yàn)：D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)胞外多糖量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；其他組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?

2.5掃描電鏡觀察牙齦卟啉單胞菌生物膜不同濃度D-纈氨酸和L-纈氨酸對(duì)牙齦生物膜影響

電鏡圖如圖5?6?7所示?生物膜形成抑制實(shí)驗(yàn)：對(duì)照組培養(yǎng)第3天和第5天菌層厚度均大于4層，且細(xì)菌間相互附著，連接緊密?與對(duì)照組相比，培養(yǎng)3d后D-纈氨酸組(50mmol/L，75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(50mmol/L，75mmol/L)生物膜細(xì)菌層數(shù)少于1層，細(xì)菌間無(wú)緊密連接?孵育5d后D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)牙齦生物膜細(xì)菌層數(shù)少于1層，細(xì)菌間無(wú)緊密連接?D-纈氨酸組(50mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(50mmol/L)牙齦生物膜細(xì)菌組細(xì)菌層數(shù)大于3層，再次形成緊密連接膜狀結(jié)構(gòu)?3d和5d時(shí)，L-纈氨酸組(50mmol/L，75mmol/L)牙齦卟啉單胞菌菌層數(shù)均大于對(duì)照組，細(xì)菌間附著良好，緊密連接?分散試驗(yàn)結(jié)果表明，D-纈氨酸組(75mmol/L)，D-纈氨酸與L-纈氨酸混合組(75mmol/L)細(xì)菌層數(shù)均小于2層，無(wú)完整生物膜結(jié)構(gòu)，其他實(shí)驗(yàn)組菌群層數(shù)仍大于4層?

聲明：本文所用圖片?文字來(lái)源《口腔醫(yī)學(xué)研究》2020年7月第36卷第7期，版權(quán)歸原作者所有?如涉及作品內(nèi)容?版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系

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