3、樣品前處理優(yōu)化

實驗室主要對自然曬干仙草進行粉碎，樣品中含有色素等其他物質(zhì)，而根據(jù)苯甲酸性質(zhì)，微溶于水、易溶于乙醇、乙醚等有機溶劑，因此實驗室采用乙醇、乙酸乙酯、乙醚、乙腈幾種實驗室常用有機溶劑對樣品進行提取，苯甲酸在電離狀態(tài)下在水中溶解度較大，因此在樣品中加入鹽酸酸化樣品，并加入氯化鈉，降低苯甲酸在水相中的溶解度，通過液液分配，達到對仙草中苯甲酸的提取。實驗結(jié)果表明：乙醚提取效果最好。
用乙醚對能力驗證樣品、實驗室質(zhì)控樣，檢測結(jié)果滿意（見表2）。

4、線性范圍，檢出限、定量限、回收率和精密度

標準溶液1000mg/L，用流動相稀釋得到0.00、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mg/L濃度點配制的曲線點。按（1）色譜條件。色譜柱Shim-packGIST2.0mmI．D×150mmL，2.0μm；流動相A：0.2mmol/L乙酸銨水溶液，B：乙腈，等度洗脫（A/B=70/30）；流速（0.4mL/min）；柱溫：40℃。進樣量10μL。（2）質(zhì)譜條件離子化模式。ESI（一）；離子噴霧電壓：4.5kV；霧化氣：氮氣3.0L/min；干燥氣：氮氣15L/min；碰撞氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱模塊溫度：400℃；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；駐留時間：20ms；延遲時間：3ms儀器條件以優(yōu)化的最佳條件進樣分析，以峰面積為縱坐標、質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標畫曲線。實驗結(jié)果表明，目標物在0.1～2.0mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程為y=173.49x+180.85，相關(guān)系數(shù)為0.9999。本研究通過配制0.05mg/L濃度點進樣11次，得到11次進樣標準偏差S=0.008，3×S為檢出限，4倍檢出限作為定量限，稱樣量1.09，本方法的檢出限為0.025mg/kg，定量限為0.1mg/kg。

在兩種不同產(chǎn)地仙草樣品中分別添加0.1mg/L、0.5mg/L、1.5mg/L三個水平濃度目標物標準品，每個水平重復(fù)測試6次，進行回收率和精密度計算，平均回收率在90.0％～98.0％之間，相對標準偏差在（RSD）2.1％～4.6％之間，結(jié)果見（見表3）。

5、實際樣品的檢測

本研究建立的方法對仙草、仙草膠粉、涼粉罐頭、仙草露等樣品進行測試，幾種仙草及其加工產(chǎn)品中均檢出了苯甲酸，其中苯甲酸含量：仙草在7.52mg/kg～8.33mg/kg間，仙草膠粉50.4mg/kg，涼粉罐頭2.60mg/kg，仙草露1.76mg/kg，（見表4）。苯甲酸標準品和仙草樣品色譜圖分別見圖8、圖9。

三、結(jié)論

本文采用乙醚作為萃取溶劑，在酸性條件下，液液萃取法提取仙草及其產(chǎn)品中苯甲酸的前處理技術(shù)，建立了仙草及其產(chǎn)品中苯甲酸含量的HPLC—MS/MS測定方法，該方法簡單、靈敏、穩(wěn)定，可滿足仙草及其產(chǎn)品中苯甲酸含量的檢測和確證。

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