一、引言

隨著我國國人健康意識的不斷提高，保健品需求量持續(xù)上升。由于保健品行業(yè)進入門檻不高，導致我國保健品行業(yè)一直以來就存在的亂象和問題，如虛假宣傳、以次充好等，因此鑒別保健品中的功效成分是很有必要的。我國對于藥品質(zhì)量標準一直有鑒別項規(guī)定，而對于保健食品還沒有此項要求。中國藥典表明，對藥物的鑒別是標示藥物，也就是當鑒別藥物的名稱、處方是已知的時，采用鑒別實驗方法用來判斷其真?zhèn)?。它不足以確證其化學結(jié)構(gòu)，不能賴以鑒別未知物，只有在藥物鑒別無誤的情況下，進行藥物的雜質(zhì)檢查和含量測定才有意義。為了保證保健食品的安全性、保健功能的有效性和質(zhì)量的可控性，國家食品藥品監(jiān)督管理總局印發(fā)了《保健食品注冊審評審批工作細節(jié)》的通知，通知里指出，根據(jù)產(chǎn)品配方及相關(guān)研究結(jié)果等，可以確定產(chǎn)品鑒別方法的，應予以全面、準確的闡述。在對于保健食品注冊和延續(xù)注冊審評審批時，需要將產(chǎn)品配方中功效成分的鑒別放在重要位置。

勁骨膠囊是經(jīng)國家批準的保健食品（國食健字G20060140），其主要配方是鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸鈣、維生素K₁和維生素D₃等，經(jīng)混合、灌裝制成的具有增加骨密度，增強免疫力的保健功能。它的功效成分是鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物中的芍藥苷、碳酸鈣、維生素K₁及維生素D₃等。其中鹽酸氨基葡萄糖可治療和預防人體所有部位的骨關(guān)節(jié)炎，可緩解和消除骨關(guān)節(jié)炎的疼痛、腫脹等癥狀，改善骨關(guān)節(jié)活動功能等。

目前國內(nèi)外尚未檢索到與勁骨康膠囊配方相同或相類似的產(chǎn)品鑒別方面的研究報道，只能對配方中單一原料進行檢索，以期獲得可供借鑒的鑒別方法。其中鹽酸氨基葡萄糖在國家藥品標準中有鑒別方法和分光光度法的含量測定，在GB/T20365標準中沒有鑒別方法，但有高效液相色譜法的含量測定。宮艷艷等用HPLC法，XbridgeAmide柱，蒸發(fā)散射光檢測器，測定保健食品中鹽酸氨基葡萄糖；Su等用HPLC法，柱前衍生化，紫外檢測器，測定保健食品中鹽酸氨基葡萄糖；Kosman等用HPLC法，紫外檢測器，測定藥品中鹽酸氨基葡萄糖等；Rani等用反相高效液相色譜法，紫外檢測器，測定藥物中氨基葡萄糖等。中國藥典一部針對白芍單味藥材有用薄層色譜法鑒別芍藥苷的方法，但沒有白芍提取物的鑒別方法。中國藥典二部有碳酸鈣、維生素K₁及維生素D₃單一原料的相關(guān)鑒別方法。勁骨膠囊是由多種藥材、食品添加劑和輔料組成，成分復雜，干擾因素多，鑒別及含量測定相對難度較大，上述文獻只能提供借鑒。針對具體的功效成分，經(jīng)研究分別采用化學反應、薄層色譜及高效液相色譜法進行鑒別，并對最主要的功效成分鹽酸氨基葡萄糖進行了含量測定。鑒于此，本文開展勁骨膠囊功效成分，包括鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸鈣、維生素K₁以及維生素D₃的鑒別，和鹽酸氨基葡萄糖含量測定的研究，彌補保健食品過去沒有鑒別項的空白，為該產(chǎn)品延續(xù)注冊提供研究資料，也為同類產(chǎn)品開展這方面研究工作，并能有效地管控產(chǎn)品質(zhì)量提供了借鑒。

二、材料與方法

1、儀器與試劑

2695高效液相色譜儀，配有紫外（ultraviolet，UV）檢測器（美國Waters公司）；AE-240分析天平（瑞士Mettler公司）；RQ-50DB超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；GF9070A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海邁源實驗設(shè)備廠）；SX2馬弗爐（上海浦東榮豐科學儀器有限公司）。
勁骨膠囊（批號190312、190313、190314無錫健特藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨基葡萄糖（純度99.9%）、白芍提取物、白芍、芍藥苷（純度99.7%）、碳酸鈣（純度100%）、維生素K₁（純度99.3%）、維生素D₃（純度99.5%）等對照品（中國食品藥品檢定研究院）；硅膠G薄層板100cm×10cm×0.25cm（青島海洋化工廠）；甲醇、乙腈（色譜純，上?；裟犴f爾試劑有限公司）；酒石酸甲鈉、硝酸銀、茚三酮、冰醋酸、正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇等（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水。

2、實驗方法

（1）鹽酸氨基葡萄糖鑒別

鹽酸氨基葡萄糖的結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點，并參考國家藥典委員會《中華人民共和國藥典四部》中的方法進行鑒別。

①堿性酒石酸銅反應法

取膠囊內(nèi)容物200mg，于10mL試管中，加水5mL溶解，作為樣品溶液；取鹽酸氨基葡萄糖對照品0.1mg，與樣品同法制成對照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含鹽酸氨基葡萄糖膠囊內(nèi)容物200mg，與樣品同法制成陰性樣品溶液。

在上述3支試管中各加入堿性酒石酸銅試液1mL，加熱，觀察反應顏色。

②硝酸銀反應法

制法與堿性酒石酸銅反應法相同，在水溶解的3支試管中，加入數(shù)滴稀硝酸試液，使呈酸性，滴加硝酸銀試液，觀察反應顏色。

③茚三酮顯色法

取膠囊內(nèi)容物200mg，加水10mL溶解，過濾，取濾液5mL，于10mL具塞試管中，作為樣品溶液；取鹽酸氨基葡萄糖對照品25mg，于10mL具塞試管中，加水5mL溶解，制成對照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含鹽酸氨基葡萄糖膠囊內(nèi)容物200mg，與樣品同法制成陰性樣品溶液。
在上述3支試管中，各加入茚三酮試液，0.5mL，沸水加熱10min，觀察反應顏色。

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