3、操作步驟

(1)樣品處理

①水溶性固體樣品的處理(如白糖)：稱取搗碎均勻樣適量，用少量水溶解后轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加0.5mol/L NaOH 4mL，搖勻，加0.5mol/L H₂S0₄4mL，加Na₂HgCl₄20mL吸收，用水定容至100mL，過濾備用。

②其他固體樣品的處理(如粉條)：稱取粉碎均勻樣適量，少量水濕潤，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，加Na₂HgCl₄ 20mL吸收，浸泡4小時(shí)以上(若上層液不澄清，要加入亞鐵氰化鉀及乙酸鋅溶液各2.5mL)，用水定容至刻度，過濾，濾液備用。

③液體樣品處理(如葡萄酒)：直接吸取5.0～lO.0mL樣品，置于100mL容量瓶中，以少量水稀釋，加20mL四氯汞鈉吸收液，搖勻，最后加水至刻度，混勻，必要時(shí)過濾備用。

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.O，3.0，4.0μg二氧化硫)，分別置于25mL具塞比色管中。各加入四氯汞鈉吸收液至10mL，然后再加入1mL氨基磺酸銨溶液(12/L)、1mL甲醛溶液(2/L)及1mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置15min。用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長550nm處測定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(3)樣品分析

吸取O.50～5.0mL樣品處理液(視含量高低而定)于25mL具塞比色管中。按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制操作進(jìn)行，于波長550nm處測吸光度，并與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。

4、注意事項(xiàng)

①此反應(yīng)的最適反應(yīng)溫度為20～25⁰C，溫度低靈敏度低，所以標(biāo)準(zhǔn)系列管和樣品在相同溫度下顯色；

②反應(yīng)溫度如果為15一16℃，靜置時(shí)間需延長為20分鐘；

③鹽酸副玫瑰苯胺中的鹽酸用量對顯色有影響，加入鹽酸量多，顯色淺；加入量少，顯色深，所以配制試劑時(shí)一定要按操作進(jìn)行；

④甲醛濃度在0.15％～0.25％時(shí)，顏色穩(wěn)定，所以應(yīng)選擇0.2％甲醛溶液；

⑤測定樣品顏色較深的樣品，可用10％活性炭脫色；

⑥樣品加入Na₂HgCl₄吸收液于100mL容量瓶中加水至刻度，搖勻，此液在24小時(shí)內(nèi)很穩(wěn)定，否則于4℃可使用一周；

⑦此法測SO₂采用HgCl₂毒性很強(qiáng)，故實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意安全。近幾年有科技報(bào)道采用EDTA(乙二胺四乙酸)試劑代替四氯汞鈉，但此實(shí)驗(yàn)沒有證實(shí)過；

⑧亞硫酸與食品中的醛(乙醛等)、酮(酮戊二酸、丙酮酸)和糖(葡萄糖、果糖、甘露糖)結(jié)合，形成結(jié)合態(tài)亞硫酸，樣品處理時(shí)加入氫氧化鈉目的是使結(jié)合態(tài)的亞硫酸釋放出來，加硫酸為了中和堿，保證顯色反應(yīng)在酸性條件下進(jìn)行；

⑨亞硝酸對反應(yīng)有干擾，加入氨基磺酸銨目的是去除亞硝酸的干擾。

(二)滴定法(葡萄酒中二氧化硫的測定)

1、原理

利用碘可以與二氧化硫發(fā)生氧化還原反應(yīng)的性質(zhì)，用碘標(biāo)準(zhǔn)溶液作滴定劑，淀粉作指示劑，測定樣品中二氧化硫的含量，反應(yīng)式如下：

I₂+SO₂+2H₂0==2I^-+S0₄^2-+4H⁺

2、試劑

①碘化鉀、重鉻酸鉀。

②硫酸溶液(1+3)：取50mL硫酸(p約1.84g/mL)，慢慢加入到150mL水中。

③硫酸溶液(1+4)：取50mL硫酸(p約1.84g/mL)，慢慢加入到200mL。水中。

④硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,c(Na₂S₂O₃·5H₂O)=0.1mol/L。

a．配制：稱取26g硫代硫酸鈉(Na₂S₂0₃·5H₂0)(或16g無水硫代硫酸鈉)，崩新煮沸且已冷卻的蒸餾水溶解，并稀釋至1000mL，混勻。貯于棕色瓶中，放兩周后使用。

b．標(biāo)定：稱取0.15g于120⁰C烘至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀，精確至0.0001g，置于碘量瓶中，加入25mL水使之溶解，加2g碘化鉀及20mL硫酸溶液(1+4)，混勻，于暗處放置10分鐘，加入150mL水，崩硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1mol/L)滴定。近終點(diǎn)時(shí)加0.5mL淀粉指示劑溶液(10g/L)，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色變?yōu)榱辆G色。同時(shí)作空白試驗(yàn)。

參考資料：食品中有毒有害物質(zhì)檢測

相關(guān)鏈接：二氧化硫，亞鐵氰化鉀，硫代硫酸鈉