3.3.2 超氧陰離子清除能力的測(cè)定

a.試劑配制

Tris溶液：稱(chēng)取6.05gTris（三羥甲基氨基甲烷）用水溶解定容至500mL，得0.1mol/L的Tris溶液。0.05mol/LHCl溶液：量取4.29mL濃鹽酸（36%～38%）用水溶解定容至1000mL水中，得0.05mol/LHCl溶液。10mmol/LHCl溶液：將0.05mol/LHCl溶液用水稀釋5倍即得10mmol/LHCl溶液。Tris-HCl緩沖液（pH8.2）：分別用0.1mol/L的Tris溶液和0.05mol/L的HCl溶液調(diào)pH為8.2即可。3mmol/L鄰苯三酚溶液：稱(chēng)取0.0378g鄰苯三酚（焦性沒(méi)食子酸）用10mmol/LHCl溶液溶解定容至100mL，得3mmol/L鄰苯三酚溶液?，F(xiàn)配現(xiàn)用，4h內(nèi)有效。

b.實(shí)驗(yàn)步驟

分別取Tris-HCl緩沖液4.5mL二組（A組為待測(cè)樣品，B組為空白對(duì)照），至于25℃水浴鍋中保溫20min，保溫結(jié)束后在A組中加入5.0mL待測(cè)樣溶液，在B組中加入5.0mL待測(cè)樣溶劑作為空白對(duì)照。分別在各組中加入0.3mL鄰苯三酚溶液，迅速搖勻充分反應(yīng)4min后加入0.2mLHCL溶液終止反應(yīng)。在325nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算超氧陰離子清除，陽(yáng)性對(duì)照為抗壞血酸。

c.計(jì)算方法

式中：OD_A為加樣品溶液的吸光度值；

OD_B為加乙醇水溶液的吸光度值。

4 結(jié)果與討論

4.1 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量

采用紫外分光光度法測(cè)定了寧夏、內(nèi)蒙及陜西三個(gè)產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮含量，銀柴胡提取物黃酮含量測(cè)定結(jié)果如下圖所示。

結(jié)果表明，寧夏、內(nèi)蒙及陜西三個(gè)產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮含量存在顯著差異，寧夏產(chǎn)地黃酮含量最高，為41mg/g，內(nèi)蒙產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量最低為21mg/g，陜西產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量為33mg/mL，寧夏和陜西產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量差異較內(nèi)蒙而言較小。

4.2 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物的抗氧化能力

4.2.1 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物ABTS自由基清除率測(cè)定

各產(chǎn)地銀柴胡提取物對(duì)ABTS自由基的清除率如圖所示，由圖中可知，三個(gè)產(chǎn)地銀柴胡提取物對(duì)自由基的清除率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴(lài)關(guān)系，隨著銀柴胡提取物黃酮濃度的增加對(duì)ABTS自由基的清除率也逐漸增加。寧夏銀柴胡提取物黃酮對(duì)ABTS自由基的半數(shù)清除濃度（IC50）為0.18mg/mL，陜西銀柴胡提取物黃酮對(duì)ABTS自由基的IC50為0.22mg/mL，內(nèi)蒙銀柴胡提取物黃酮對(duì)ABTS自由基的IC50為0.31mg/mL，抗壞血酸的IC50為0.11mg/mL，內(nèi)蒙產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮ABTS自由基清除率最低，說(shuō)明銀柴胡提取物黃酮具有較好的清除ABTS自由基的能力，其中寧夏和陜西的銀柴胡最好。

4.2.2 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物超氧陰離子清除率測(cè)定

各產(chǎn)地銀柴胡提取物對(duì)超氧陰離子基的清除率如圖所示，由圖中可知，三個(gè)產(chǎn)地銀柴胡提取物對(duì)自由基的清除率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴(lài)關(guān)系，隨著銀柴胡提取物黃酮濃度的增加對(duì)超氧陰離子的清除率也逐漸增加。寧夏銀柴胡提取物黃酮對(duì)超氧陰離子的半數(shù)清除濃度（IC₅₀）為0.13mg/mL，內(nèi)蒙銀柴胡提取物黃酮對(duì)超氧陰離子的IC₅₀為0.15mg/mL，陜西銀柴胡提取物黃酮對(duì)超氧陰離子的IC₅₀為0.24mg/mL，抗壞血酸的IC₅₀為0.09mg/mL，說(shuō)明銀柴胡提取物黃酮具有一定的清除超氧陰離子的能力。

4.3 討論

野生銀柴胡主要分布于干旱少雨的荒漠、半荒漠草原區(qū)，極耐干旱、耐貧瘠、耐寒，忌澇，近年來(lái)隨著人們的過(guò)度采挖，銀柴胡野生資源急劇減少，因此銀柴胡的人工種植是替代野生資源的重要途徑，目前人工種植基地主要集中在寧夏、內(nèi)蒙古、甘肅、陜西等地，其中，寧夏作為銀柴胡的主要道地產(chǎn)區(qū)，銀柴胡的種植時(shí)間較早，規(guī)模較大。

銀柴胡中含有的黃酮類(lèi)成分具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤等功效，周麗等通過(guò)超聲乙醇提取銀柴胡得到總黃酮含量在0.8%左右，本研究通過(guò)進(jìn)一步的大孔樹(shù)脂吸附純化得到黃酮含量提高了約5倍左右，同時(shí)本文對(duì)于三個(gè)產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮類(lèi)成分及體外抗氧化能力進(jìn)行了對(duì)比研究，測(cè)得寧夏產(chǎn)地的黃酮類(lèi)成分含量最高，陜西次之，內(nèi)蒙產(chǎn)地較低，寧夏產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量為41mg/g；比較了三種產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮體外對(duì)ABTS自由基和超氧陰離子的清除能力，得到三種產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮均具有較好的體外抗氧化能力，其中寧夏產(chǎn)地抗氧化能力最強(qiáng)。綜上所述，寧夏作為銀柴胡道地產(chǎn)區(qū)之一其生產(chǎn)的銀柴胡提取物黃酮含量最高，抗氧化能力最強(qiáng)，可作為一種天然抗氧化成分應(yīng)用于食品中，具有廣闊的市場(chǎng)前景，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，本文為銀柴胡的種植及在食品方面的應(yīng)用研究提供了參考。

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