本文建立一種采用高效液相色譜測定甜茶葉中甜茶苷含量的方法。依據試驗結果，甜茶苷測定前處理過程中，以30%乙腈溶液為溶劑，采用超聲方式對甜茶葉進行處理能獲得最佳的甜茶苷提取率。色譜條件：C18柱（250mm×4.6mm×5µm）；流動相：0.05%磷酸溶液-乙腈（68+32）；流速：1mL/min；檢測波長：210nm；進樣量：5µL；柱溫：40℃；外標法定量。在該色譜條件下，甜茶苷濃度為0mg/mL～1.5mg/mL的范圍內，甜茶苷峰面積（Y）與甜茶苷濃度（X）具有良好的線性關系，線性回歸方程Y=21.0844X，相關系數r=1.0000；加標回收率為96.2%～102.3%；精密度（RSD）為1.23%。相關試驗數據證明，該方法快速簡單、重復性好、準確，適用于甜茶葉中甜茶苷含量的測定。

1引言

甜茶（RubussuavissimusS.Lee）是薔薇科植物甜葉懸鉤子屬多年生有刺灌木，廣西野生甜茶為多年生純天然、原生態(tài)、無污染常綠木本植物，是廣西特有的野生植物，主要生長在廣西梧州、桂林及柳州等地區(qū)的。其適宜生成在亞熱帶氣候區(qū)及海拔500-1000m的丘陵山地，由于其葉片味甜，故名甜茶。甜茶是一種低熱能的天然甜味植物。野生甜茶具有相當高的營養(yǎng)價值，其中以廣西甜茶最為代表，含有極高的甜茶苷和茶多酚外，還含有18種氨基酸及人體所必需的微量元素等成分，其中甜茶苷是一種二萜葡萄糖低熱量甜料，在化學結構上與甜菊苷近似，它們均由相同的苷元組成，二者的區(qū)別僅在甜茶苷中十位碳上少接一分子葡萄糖。甜茶苷的甜度為蔗糖的300倍，而熱值僅是蔗糖的5%，屬高甜度、低熱能的天然甜味物質。甜茶苷能激活人的胰島素，降低血糖，有很好的保健作用，對糖尿病患者和腎病病人有一定的療效。甜茶葉提取的甜茶苷是甜味植物中口感最佳的甜味劑，因其綠色天然，保健低熱而在食品、飲料、冷食制品、調味品、醫(yī)藥工業(yè)、美容化妝品等各類行業(yè)中展現(xiàn)出良好的經濟價值。

廣西甜茶中甜茶苷的含量與其生長時期有關，不同生長發(fā)育階段葉子中甜茶苷的含量有著明顯的差異，嫩葉中最高，成葉次之，落葉最低；甜茶葉中甜茶苷的含量與季節(jié)也有關系，5月底較高，6月底開始上升，7月、8月達到最高，9月底開始下降，12月底降到最低值。

甜茶苷作為甜茶中最重要的功能性成分之一，其含量的測定對于甜茶葉的綜合利用十分關鍵。

目前國標中尚無針對甜茶中甜茶苷含量測定的方法，本論文旨在建立高效液相色譜法測定甜茶中甜茶苷含量的有效準確方法，為甜茶苷的開發(fā)應用作出貢獻。

2實驗部分

2.1儀器及試劑

UltiMate3000高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器；分析天平：感量為0.0001g和0.00001g;KQ-300DB超聲波發(fā)生器；離心機：轉速≥8000r/min;XHF-D高速分散器；恒溫振蕩器；移液槍。

乙腈（色譜純，賽默飛世爾）；無水乙醇、石油醚（沸點30～60°）、磷酸（分析純，上海國藥化學試劑）；實驗用水為超純水。

甜茶葉：甜茶原葉采摘自廣西桂林平樂，經干燥后制得。

2.2標準溶液的制備

準確稱取甜茶苷標準品20mg，用30%乙腈溶解且定容至10mL混勻，配制成2.0mg/mL的標準儲備溶液。用移液器準確吸取0uL、150uL、250uL、500uL、1000uL、1500uL標準儲備液后用30%乙腈溶液稀釋至2mL，配制成質量濃度為0mg/mL、0.15mg/mL、0.25mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL的標準系列工作溶液。

2.3甜茶苷樣品測定的色譜條件

2.3.1色譜條件

色譜柱：C18柱（柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5µm）；流動相：0.05%磷酸溶液+乙腈（68+32）；流速：1mL/min；進樣量：5µL；柱溫：40℃。

2.3.2檢測波長的確定

選取甜茶苷標準溶液進樣，在2.3.1的色譜條件下，利用高效液相色譜儀的二極管陣列全波長紫外掃描功能掃描。

2.4色譜出峰評價

按2.3確定的色譜條件，對甜茶苷含量為0.15mg/mL、0.50mg/mL、1.50mg/mL的標準點（曲線最低濃度點、中間濃度點以及最高濃度點）進樣分析，得到液相色譜圖。

2.5甜茶苷測定前處理提取過程的研究

將甜茶葉經粉碎后備用。

2.5.1不同溶劑對提取對甜茶苷含量測定的影響

選取三個甜茶葉樣品（稱樣量約為0.5g），分別選取70%乙醇、純水以及30%乙腈作為提取溶劑，提取溶劑用量為10mL，超聲提取30min，將提取液用提取溶劑定容至25mL，過濾，測定甜茶苷含量。

2.5.2不同提取方式對甜茶苷含量測定的影響

選取三個甜茶葉樣品（稱樣量約為0.5g），按表1的四種方式進行提取，將提取液用30%乙腈定容至25mL，過濾，測定甜茶苷含量。

2.6加標回收試驗

稱取四份同一甜茶葉樣品，其中一份作為本底，另外三份分別按照加標量為0.104g/100g、0.264g/100g、0.427g/100g進行加標，然后按照已經確定的甜茶苷測定方法進行測定，計算其回收率。

2.7精密度試驗

在確定的甜茶苷含量測定條件下，對同一甜茶葉樣品進行6次重復測定。利用6次測定結果的RSD對精密度進行評價。

聲明：本文所用圖片、文字來源《輕工科技》，版權歸原作者所有。如涉及作品內容、版權等問題，請與本網聯(lián)系刪除。

相關鏈接：甜茶苷，胰島素，乙腈溶液