流行性感冒（簡(jiǎn)稱流感）是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，其主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咳嗽等，嚴(yán)重影響了人們生命健康和日常生活。近年來流感時(shí)有爆發(fā)，隨著病毒的變異，使得抗病毒藥物的研發(fā)越來越受到人們的關(guān)注。乃孜來顆粒（臨床批件號(hào)CXZL1900019）是國(guó)醫(yī)大師巴黑·玉素甫臨床20余年的經(jīng)驗(yàn)方，由一枝蒿、神香草、天山堇菜、萵苣子、破布木果、洋甘菊、大棗和薄荷8味藥材組成，用于治療病毒引起的上呼吸道感染、發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咳嗽、流鼻涕等，臨床療效顯著。前期開展并完成了制備工藝、藥效學(xué)和毒理學(xué)等相關(guān)研究，但尚未系統(tǒng)研究其物質(zhì)基礎(chǔ)。

中藥化學(xué)成分復(fù)雜，尤其是復(fù)方，但明確藥物化學(xué)成分組成對(duì)于中藥臨床使用的安全性、有效性具有至關(guān)重要的作用，超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜法（UHPLC-Q-Orbitrap-MS）因其具有高分辨率、高靈敏度、高質(zhì)量精度等特點(diǎn)，被廣泛用于中藥化學(xué)成分的快速定性分析?；诖?，本實(shí)驗(yàn)擬采用UHPLC-Q-Orbitrap-MS對(duì)乃孜來顆粒進(jìn)行化學(xué)成分分析和歸屬，提供全面的化學(xué)輪廓，以期為其質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提升，藥效作用機(jī)制和代謝特征闡釋、臨床合理應(yīng)用等奠定基礎(chǔ)。

1材料

UltiMate3000型超高效液相色譜儀（美國(guó)Dionex公司），Q-Orbitrap型四級(jí)桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)ThermoFisherScientific公司），SQP型1/10萬(wàn)電子分析天平。

綠原酸、菊苣酸、芹菜素、沒食子酸、紫云英苷、山柰苷、高車前素對(duì)照品（上海純優(yōu)生物科技有限公司，批號(hào)分別為19121609，11050701，19070308，15051904，13062403，p0571，200062707），迷迭香酸、金絲桃苷、異槲皮苷、蘆丁、蒙花苷、秦皮乙素、異鼠李素、阿魏酸、原兒茶酸、木犀草素、槲皮素、山柰酚、齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為111871-201505，111521-201809，111809-201804，100080-201811，111528-01509，110741-200607，110860-201611，110773-201313，110809-200604，111520-200504，100081-201408，110861-201310，0709-9803和110742-200312），異綠原酸C對(duì)照品（北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，批號(hào)18031603）；新綠原酸，隱綠原酸，異綠原酸A，異綠原酸B，對(duì)香豆酸，咖啡酸對(duì)照品（北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，批號(hào)分別為18031001，18032403，18032601，18031602，130316，130305）；1，3-二咖啡?；鼘幩?，鞣花酸，木犀草苷，D-（-）-奎寧酸，異鼠李素-3-O-蕓香糖苷對(duì)照品（成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為MUST-14052604，MUST-14110807，151111，MUST-15012208，151110）；一枝蒿酮酸（中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所，批號(hào)JSP11-2530-2014）；所有對(duì)照品的純度均≥98%。水為屈臣氏蒸餾水，甲醇、甲酸、乙腈為質(zhì)譜純，其他試劑均為分析純。

乃孜來顆粒（批號(hào)200405）由中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所民族藥關(guān)鍵技術(shù)與工藝工程研究中心生產(chǎn)，方中所含8味藥材一枝蒿、神香草、破布木果、天山堇菜、薄荷、大棗、萵苣子和洋甘菊均購(gòu)自新疆恩薩爾維吾爾醫(yī)飲片藥業(yè)有限公司（批號(hào)依次為20200902，20190708，20190901，20201225，20200914，20200402，20201201，206202007），經(jīng)中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所劉戈宇研究員鑒定，大棗和薄荷符合2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）相關(guān)規(guī)定；神香草、天山堇菜、破布木果和洋甘菊均符合1999年版《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（維吾爾藥分冊(cè)）規(guī)定；一枝蒿符合《衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥材第一冊(cè)）相關(guān)規(guī)定；萵苣子符合1992年版《維吾爾藥材標(biāo)準(zhǔn)》（上冊(cè)）相關(guān)規(guī)定。

2方法與結(jié)果

2.1色譜及質(zhì)譜條件

2.1.1色譜條件

WatersACQUITYUPLCBEHShieldRPC18色譜柱（2.1mm×100mm，1.7µm），柱溫35℃，進(jìn)樣量2μL，流速0.3mL·min-1，流動(dòng)相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脫（0~3min，1%B；3~16min，1%~11%B；16~30min，11%~34%B；30~37min，34%~52%B；37~42min，52%~100%B；42~44min，100%B）。

2.1.2質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源（ESI），輔助氣和離子傳輸管溫度分別為300，350℃，輔助氣體積流量10μL·min-1；正離子模式下噴霧電壓3.5kV，鞘氣體積流量40μL·min-1；負(fù)離子模式下噴霧電壓2.8kV，鞘氣體積流量38μL·min-1。采用正、負(fù)離子同時(shí)掃描的FullMS/dd-MS2模式，其中包括FullMS分辨率7萬(wàn)，dd-MS2分辨率17500，碰撞能量35eV，掃描范圍m/z100~1500。

2.2溶液制備

乃孜來顆粒研細(xì)后過100目篩，取0.2g，精密稱定，置25mL量瓶中，加水適量，超聲30min（功率500W，頻率35kHz），取出，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，12000r·min-1離心5min（離心半徑14mm），取上清液，得8.0g·L-1提取液（以生藥量計(jì)），過0.22μm微孔濾膜，作為供試品溶液備用。取各對(duì)照品約5.0mg，精密稱定后置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度均約為0.2g·L-1的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別量取上述儲(chǔ)備液適量，置于同一量瓶中混合后加甲醇稀釋，得質(zhì)量濃度均處于2~4mg·L-1的混合對(duì)照品溶液。

2.3質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析

結(jié)合ChemSpider，PubChem，ChemicalBook數(shù)據(jù)庫(kù)中化合物，以及乃孜來顆粒中單味藥材的質(zhì)譜信息，建立化學(xué)成分信息庫(kù)，根據(jù)乃孜來顆粒的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)提供的準(zhǔn)分子離子及加合離子信息，推測(cè)一級(jí)質(zhì)譜的精確相對(duì)分子質(zhì)量，選擇誤差（δ）在5ppm（1ppm=1×10^-6）以內(nèi)的化合物，經(jīng)Xcalibar4.0軟件擬合計(jì)算相應(yīng)的分子式，初步對(duì)各化學(xué)成分的分子式進(jìn)行前期推測(cè)，再結(jié)合對(duì)照品、相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)色譜峰進(jìn)行指認(rèn)和歸屬。

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相關(guān)鏈接：甲醇，負(fù)離子，芹菜素