4、操作步驟

準確稱取2g～3g(準確至0.01g)均勻試樣(揮發(fā)酸少的可酌量增加)，用無二氧化碳蒸餾水50mL洗入250mL燒瓶中，加入10%磷酸1mL。連接水蒸汽蒸餾裝置，加熱蒸餾至餾出液300mL為止。在嚴格相同的條件下做一空白試驗（蒸汽發(fā)生瓶內的水必須預先煮沸10min，以除去二氧化碳）。

餾出液加熱至60⁰C～65⁰C，加入酚酞指示劑3滴～4滴，用氫氧化鈉標準液滴定至微紅色，1min不褪色為終點。

5、結果計算

式中：c——標準溶液NaOH物質的量的濃度，mol·L^-1；

         V——樣液滴定時NaOH標準溶液的用量,mL；

        Vo——空白滴定時NaOH標準溶液的用量,mL；

        10^-3——將mL換算成L的系數；

        60——乙酸的換算系數,g·mo1^-1;

        m——樣品的質量，g；

        100——換算為質量百分數。

五、有效酸度（PH）的測定（電位法）

果蔬食品pH值的變動不僅取決于原料品種和成熟度，而且取決于加工方法。其p值與總酸度之間沒有嚴格的比例關系，pH值的大小不僅僅取決于酸的數里和性質(種類)，而且受其中的酸、果膠、某些鹽類和蛋白質級沖能力的影響。

測定pH值的方法有:pH試紙法、標準色管比色法和pH計測定法。其中以pH計最準確，操作也簡便。pH計的型號很多，使用時參照說明書即可。

pH標準溶液可以用國家計最管理機關提供的標準物質按規(guī)定配制;或按一般專業(yè)書籍上的配方配制。

六、水果、蔬菜中有機酸組分的測定(高效液相色譜法)

有機酸是果、蔬的主要組成分之一。果、蔬中有機酸的種類和含量變化很大。這些變化決定于品種、成熟度、氣候條件及其它因素。常用氣相色譜法、薄層色潛法、高效液相色譜法來測定有機酸。果蔬中蘋果酸和檸檬酸的一般含量范圍見表41-1。

1、方法原理

試樣經處理后，直接將試樣液注入反相化學健合相色譜體系，用磷酸氫二銨溶液［p(NH₄)₂HPO₄=5g·L^-1］為流動相，有機酸在兩相中分配分離，按照其碳原子數由少到多的順序從色譜往中洗脫下來.用紫外檢測器(214nm)或示差折光檢測器檢測并與標準樣品比較定量。

2、主要儀器

高效液相色譜儀配C₁₈色譜柱及紫外檢測器，微量注射器。

3、試劑

（1）酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸等所需測定的有機酸標準樣品；

（2） Sep-PAKC₁₈凈化柱。

（3）磷酸氫二銨溶液[p(NH₄)₂HPO₄=5g·L^-1]:5g磷酸氫二銨[(NH₄)₂HPO₄]溶于水稀釋至1L。用H₃PO₄調至pH= 2.5，經0.45μm微孔濾膜過濾，離心脫氣后使用；

（4）氫氧化鈉溶液〔c(NaOH)=0.01mol·L^-1]:0.4g氫氧化鈉(NaOH，化學純)溶于水稀釋至1L。

4、操作步驟

（1）有機酸標準溶液的制備：分別取適量有機酸單個標準樣，如酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸等于25mL容量瓶中，用氫氧化鈉溶液(試劑4)溶解后定容。

（2）樣品溶液的制備對于液體試樣裕經合適倍數稀釋，用Sep-PAKC₁₈凈化柱處理，收集餾出液，經0.45μm微孔濾膜過濾后備用;對于固體或半固體試樣，要將其搗碎，均質后，加入一定量的氫氧化鈉溶液(試劑4)提取。經離心分離或過濾后收集提取液，用Sep-PAKC?凈化柱處理，收集餾出液，經0.45 5m微孔濾膜過濾后備用。

（3）色譜條件

固定相:C₁₈鍵合相;

流動相:磷酸氫二銨溶液(試劑3), pH=2.5；

流速:2mL/min；

進樣量:10μL；

檢測器:紫外檢側器，214nm,0.1 AUFS。

參考資料：土壤農業(yè)化學分析方法