2 方法與結(jié)果

2.1 18批黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)對應(yīng)實(shí)物的制備

對黃連湯煎煮工藝進(jìn)行研究，確定最佳工藝為：稱取黃連41.40 g，甘草（水炙）41.40 g，干姜41.40 g，桂枝41.40 g，人參27.60 g，半夏（湯洗）60.00 g，大棗42.00 g于砂鍋中，加2000 mL水，浸泡60分鐘，以武火（2200 W）煮沸后，調(diào)節(jié)火力至文火（900 W）保持微沸，煎煮約60分鐘后，趁熱過濾，濾液放涼后加水調(diào)整體積至1200 mL。根據(jù)最佳工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示指標(biāo)性成分黃連堿、巴馬汀、小檗堿、甘草苷、甘草酸、6-姜辣素、桂皮醛平均含量分別為4.52、5.83、15.84、1.70、2.95、1.28、1.39 mg·g-1，RSD分別為0.72%、0.74%、0.71%、0.86%、1.6%、1.3%、0.65%，說明黃連湯工藝穩(wěn)定。

采用隨機(jī)數(shù)表法，對各藥味飲片批次進(jìn)行隨機(jī)組合及排序，見表2。按照最佳工藝制備18批黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)對應(yīng)實(shí)物，編號為HLD1~HLD18。

2.2 黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜方法的建立

2.2.1色譜條件

色譜柱：Merck Purospher Star LP RP-18 endcapped色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（含0.05mol·L-1磷酸二氫鉀，磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0，B）；梯度洗脫(0～7 min，10%~22% A；7～19 min，22%～23.5% A；19～28 min，23.5%～24% A；28～42 min，24%～35% A；42～52 min，35%～63% A；52～54 min，63%～10% A；54～56 min，10% A），流速：1 mL·min-1，檢測波長：280 nm，柱溫：25 ℃，進(jìn)樣體積：10 μL。特征圖譜見圖1。

5.甘草苷；10.黃連堿；11.巴馬??；12.小檗堿；14.桂皮醛；15.甘草酸；17.6-姜辣素

對黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)特征圖譜進(jìn)行特征峰歸屬，共歸屬17個特征峰，經(jīng)對照品指認(rèn)7個特征峰信息。其中1，2，3，6，7，8，9，10（黃連堿），11（巴馬?。?2（小檗堿）號峰來源于黃連；4，5（甘草苷），15號峰（甘草酸）來源于甘草；13，14（桂皮醛），16號峰來源于桂枝；17號峰（6-姜辣素）來源于干姜；人參、半夏、大棗在此條件下沒有色譜信息，后續(xù)將進(jìn)行進(jìn)一步研究。

2.2.2供試品溶液的制備

精密量取黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)對應(yīng)實(shí)物2 ml至10 ml量瓶中，加入甲醇7 mL，再加水至刻度，使甲醇濃度為70%，稱定重量，超聲30分鐘，放冷，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。同法制成各單味藥、各陰性供試品溶液。

2.2.3 精密度考察

取同一供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次。以小檗堿為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保留時間和相對峰面積RSD，結(jié)果各共有峰相對保留時間RSD＜0.39%，相對峰面積RSD＜2.8%，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復(fù)性考察

取同一份黃連湯物質(zhì)基準(zhǔn)對應(yīng)實(shí)物，按2.2.2項(xiàng)下平行制備6份供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。以小檗堿為參照峰，計(jì)算各共有峰相對保留時間和相對峰面積RSD，結(jié)果各共有峰相對保留時間RSD＜0.65%，相對峰面積＜2.8%，表明方法重復(fù)性良好。

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相關(guān)鏈接：磷酸二氫鉀，姜辣素，巴馬汀