家禽生產(chǎn)過程中，可能會(huì)由于飼糧中存在的問題，如溫度、光照和通風(fēng)不足、腸道菌群的失衡、飼用抗生素的濫用及細(xì)菌或病毒感染等因素產(chǎn)生氧化應(yīng)激，并因此受到不同程度的氧化損傷[1]。氧化應(yīng)激是動(dòng)物體內(nèi)存在的過氧化物和自由基數(shù)量超過了其抗氧化能力。在氧應(yīng)激中家禽激活機(jī)體復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制，消耗了自身生長或生產(chǎn)所需要的大量能量來防御氧化損傷，這將導(dǎo)致家禽養(yǎng)殖成本的增加，生產(chǎn)性能或產(chǎn)品品質(zhì)下降。為了提高機(jī)體抗氧化能力，在家禽飼糧中添加抗氧化物質(zhì)是重要的有效緩解氧化應(yīng)激損傷的手段之一。

牛至有效成分牛至精油被證實(shí)具有較強(qiáng)的抗氧化活性，能促進(jìn)家禽生產(chǎn)。生產(chǎn)牛至精油類產(chǎn)品，可使用超臨界流體進(jìn)行提取，然后進(jìn)行包膜處理，工藝復(fù)雜，成本高，主要原因?yàn)榕Ｖ辆筒蝗苡谒?，易容于有機(jī)溶劑，很難用水浸出。林霜霜研究顯示牛至水提取物抗氧化能力低于有機(jī)溶劑提取物。也有相反的結(jié)論，早克然·司馬義研究牛至水提取物比醇提取物具有顯著的體外清除自由基能力?？赡艿慕忉屖?，牛至中即含有水溶性和也含精油類脂溶性抗氧化成分。β-環(huán)糊精具有“內(nèi)親油，外親水”的空腔結(jié)構(gòu)，具有促進(jìn)植物中非極性小分子的溶出作用。把牛至粉浸泡于1%β-環(huán)糊精水溶液中，制成牛至1%β-環(huán)糊精混懸劑，通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，評(píng)測(cè)牛至1%β-環(huán)糊精混懸劑抗氧化能力，為牛至產(chǎn)品的開發(fā)提供新的思路。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物

2020年9月9日至2020年10月14日，在北京王家磨養(yǎng)殖場選擇160只40日齡北京柴雞。

1.1.2藥品

牛至，購自玉林市玉州區(qū)菩提藥源食品經(jīng)營部。

1.1.3主要試劑

2，2-聯(lián)氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽（ABTS）、甲醇（分析純），均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒、丙二醛（MDA）含量檢測(cè)試劑盒，均購自北京索萊寶科技有限公司。

1.1.4主要儀器

分級(jí)超細(xì)連續(xù)式水冷粉碎機(jī)（DLF-555），購自溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司；超聲清洗機(jī)（KQ-500DV），購自昆山市超聲儀器有限公司；高速離心機(jī)（GT10-1），購自北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；多功能酶標(biāo)儀（SpectraMaxi3X），購自美谷分子儀器（上海）有限公司。

1.2方法

1.2.1牛至混懸劑的制備

將牛至干燥，粉碎，過100目篩，得牛至粉。精確稱取牛至粉末20g，置玻璃瓶中，量取500ml1%β-環(huán)糊精溶液，密封，40℃超聲40min，210℃滅菌20min，得牛至混懸劑。

1.2.2牛至甲醇提取液

精確稱取牛至粉0.20g，置離心管中，量取甲醇5ml，密封，40℃超聲40min，離心取上清液，得牛至甲醇提取液。

1.2.3體外抗氧化能力

供試品溶液的制備：分別精密量取牛至混懸劑和甲醇提取液1ml，置10ml容量瓶中，用甲醇定容，混勻，取適量10000r/min離心10min，得供試品溶液。ABTS自由基溶液配制：精密稱取ABTS試劑200mg，用蒸餾水定容至50ml容量瓶中，再精密稱取35mg過硫酸鉀，用蒸餾水定容至50ml容量瓶中，搖勻后與ABTS水溶液混合，在室溫黑暗處反應(yīng)12～16h，得ABTS自由基儲(chǔ)備液。再用甲醇稀釋ABTS自由基儲(chǔ)備液，使其在734nm吸光度值為0.90±0.02，即得ABTS自由基溶液。依次吸取0、2、4、8、16、32µl供試品溶液置96孔板中，依次加入甲醇70、68、62、54、38µl，混勻，分別加入ABTS自由基溶液140µl，避光室溫，反應(yīng)6min，734nm測(cè)定吸光值，平行3次。根據(jù)以下公式計(jì)算ABTS自由基清除率，并計(jì)算出半數(shù)抑制率IC50值。

 
式中：I為供試品溶液對(duì)ABTS自由基的清除率；A0為ABTS自由基空白對(duì)照的吸光度值；AS為供試品溶液與ABTS自由基反應(yīng)后的吸光度值。

1.2.4試驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

北京柴雞按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組兩個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40只北京柴雞。每組北京柴雞置50m2欄中散養(yǎng)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，參照NRC(1994）蛋雞的營養(yǎng)需要配制，試驗(yàn)組每0.6kg基礎(chǔ)飼糧添加100ml牛至混懸劑，進(jìn)行拌飼給藥。試驗(yàn)期間動(dòng)物自由采食和飲水。試驗(yàn)為期35d，其中前7d為預(yù)試期，各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧，正試期28d，按組別飼喂各組飼糧。

1.2.5血清中SOD活性檢測(cè)和MDA含量測(cè)定

在正試期的第28d從各重復(fù)中選取5只試驗(yàn)北京柴雞，翅下靜脈采血3ml，靜置1h后于4000r/min離心10min，分離血清，采用試劑盒法測(cè)定血清MDA含量和SOD活性。

1.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS21.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行差異顯著性分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2結(jié)果與分析

2.1牛至混懸劑清除ABTS自由基的能力

ABTS在過硫酸鉀作用下被氧化成綠色的ABTS自由基，抗氧化物抑制ABTS自由基的產(chǎn)生，使得綠色變淡，因此在734nm處測(cè)量加入抗氧化物質(zhì)前后ABTS自由基的吸光度值變化，可以計(jì)算出樣品的總抗氧化能力。牛至混懸劑和甲醇提取液對(duì)ABTS自由基的清除能力結(jié)果見表1。

在測(cè)量范圍內(nèi)，隨著牛至混懸劑和甲醇提取液濃度的增加，對(duì)ABTS自由基的清除能力都呈現(xiàn)出對(duì)數(shù)增加，半數(shù)抑制率IC50分別為0.124mg/ml和0.157mg/ml。牛至混懸液對(duì)ABTS自由基的清除能力略高于牛至甲醇提取液，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)差異不顯著。

2.2牛至混懸劑對(duì)北京柴雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

注：同列數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，大寫字母完全不同表示差異極顯著（P<0.01)

由表2可知，與對(duì)照組相比，飼糧添加牛至混懸劑極顯著降低北京柴雞血清MDA含量和極顯著提高血清SOD活性。

3討論

3.1牛至混懸劑雞體外抗氧化能力

牛至混懸劑對(duì)ABTS自由基的清除能力高于牛至甲醇提取液。β-環(huán)糊精促進(jìn)了牛至中揮發(fā)油成分的溶出，提高了水溶液的抗氧化水平。

3.2牛至混懸劑雞體內(nèi)抗氧化能力

生物體內(nèi)，氧化應(yīng)激過程中產(chǎn)生的自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，其氧化終產(chǎn)物MDA，會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。MDA含量是反映機(jī)體抗氧化潛在能力的重要參數(shù)，可以反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化速率和強(qiáng)度，也能間接反映組織過氧化損傷程度。SOD是機(jī)體代謝所產(chǎn)生內(nèi)源性抗氧化酶，清除機(jī)體產(chǎn)生的自由基，活性高低可反應(yīng)機(jī)體抗氧化的防御能力。北京柴雞用牛至混懸劑按照每0.6kg飼糧添加100ml懸液，進(jìn)行拌飼給藥能及顯著提高血清中SOD活性和降低MDA含量，具有良好的抗氧化應(yīng)激作用。

4結(jié)論

牛至混懸劑制備簡單，體外抗氧化活性高于牛至甲醇提取物，能極顯著增加家禽抗氧防御能力，減少家禽的氧化應(yīng)激損傷?？梢宰鳛橹参锟寡趸苿┰谛竽琉B(yǎng)殖中進(jìn)行推廣。

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