2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取已知含量的供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯峰面積的RSD分別為0.84%、1.03%、0.76%、1.48%，表明穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的樣品6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行操作，結(jié)果廠家A（批號(hào)190802）中氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸的平均含量分別為1.41、0.10、1.34mg·mL-1,RSD為0.53%、0.86%、0.46%；廠家B（批號(hào)190502）氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、羥苯乙酯的平均含量分別為1.90、0.05、0.29mg·mL-1,RSD為0.77%、1.32%、1.09%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8回收率試驗(yàn)

取同一批已知含量的供試品（批號(hào)190802）6份，每份1mL，置10mL量瓶中，分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件進(jìn)樣，分別測(cè)定其峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果見表1。

2.9樣品含量測(cè)定

取氫溴酸右美沙芬糖漿各批樣品適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

3討論

3.1色譜條件的選擇

本研究考察甲醇-水、甲醇-磷酸二氫銨緩沖液系統(tǒng)作為流動(dòng)相，分別進(jìn)行等度、梯度洗脫，在等度洗脫條件下幾種組分分離不理想且耗時(shí)較長(zhǎng)；采用梯度洗脫時(shí)發(fā)現(xiàn)，5-HMF極性大，在有機(jī)相比例較小時(shí)就很快出峰，而苯甲酸、氫溴酸右美沙芬、羥苯乙酯在有機(jī)相比例較高時(shí)才能較快出峰，為了縮短分析時(shí)間，在梯度程序的后半段調(diào)高了有機(jī)相比例。結(jié)果采用甲醇-磷酸二氫銨緩沖液系統(tǒng)并進(jìn)行梯度洗脫，樣品中各待測(cè)組分之間能夠有效分離，且相鄰成分不干擾測(cè)定。

3.2溶劑與提取方法的選擇

在試驗(yàn)中對(duì)比了不同的提取溶劑水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇對(duì)各成分的提取效果，結(jié)果以50%甲醇作為提取溶劑時(shí)，樣品中所測(cè)成分綜合提取效果最佳；同時(shí)考察超聲時(shí)間0、5、10、20min對(duì)提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲10min即可提取完全。

3.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

試驗(yàn)采用DAD檢測(cè)器，在190～400nm的范圍內(nèi)對(duì)待測(cè)成分色譜峰進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，氫溴酸右美沙芬、5-羥甲基糠醛、苯甲酸和羥苯乙酯分別在279nm、284nm、273nm、257nm處有最大吸收。根據(jù)四種成分的紫外光譜圖進(jìn)行分析，綜合考慮，選擇279nm波長(zhǎng)較合適，在此波長(zhǎng)條件下，四種組分均有較強(qiáng)響應(yīng)值。

3.4結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)收集了市售的2個(gè)廠家共8批氫溴酸右美沙芬糖漿，結(jié)果顯示，同一廠家的防腐劑用量無明顯差異?！吨袊?guó)藥典》2015年版四部通則中糖漿劑項(xiàng)下規(guī)定：苯甲酸用量不得過0.3%，羥苯酯類用量不得過0.05%。試驗(yàn)測(cè)得的8批樣品中的防腐劑用量均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)。5-HMF在8批樣品中均有檢出，不同廠家不同批號(hào)之間5-HMF含量有明顯差異。廠家A氫溴酸右美沙芬糖漿用量為一次20mL，一日3次，則5-HMF最大日暴露量為15.78mg；廠家B氫溴酸右美沙芬糖漿用量為一次15mL，一日3次，則5-HMF最大日暴露量為2.25mg，均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出了5-HMF作為2類遺傳毒性雜質(zhì)限度（TTC為1.5μg·d-1）的要求。

由于TTC是高度保守的暴露量，限度制定也需根據(jù)生產(chǎn)工藝難度及用藥周期等情況進(jìn)行調(diào)整。文獻(xiàn)中報(bào)道，2015年版藥典中收載的5%、10%葡萄糖注射液及以葡萄糖注射液為載體的制劑的最大日暴露量分別為1.75mg、3.5mg和5mg，根據(jù)樣品中5-HMF檢出情況，參考最大日暴露量5mg來制定本品的限度，經(jīng)折算，廠家A（規(guī)格0.15%，每日最大用量60mL）的限度為0.08mg·mL-1，廠家B（規(guī)格0.2%，每日最大用量45mL）的限度為0.11mg·mL-1，結(jié)果，廠家B4批樣品5-HMF均在限度范圍內(nèi)，廠家A有3批樣品超出限度，建議完善生產(chǎn)工藝，或兼顧安全性和質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)兩方面的因素，綜合考慮制定合適的限值。

防腐劑和遺傳毒性雜質(zhì)對(duì)人體的毒副作用越來越受到重視，有些廠家已經(jīng)對(duì)口服液體制劑中的防腐劑或5-HMF進(jìn)行質(zhì)量控制并訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，本研究建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，既提高了氫溴酸右美沙芬糖漿的質(zhì)量控制，又簡(jiǎn)化了檢驗(yàn)過程，為修訂該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

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