2.4 萃取試劑/洗脫劑種類對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響

乙酸為萃取試劑時(shí)，萃取得到的萃取劑相在下層，油相在上層；乙腈和甲醇為萃取試劑時(shí)，萃取劑相在上層，油相在下層；乙醇為萃取試劑時(shí)，溶液不分層且較混濁。異丙醇為萃取試劑時(shí)，溶液清澈且不分層。

因此，乙醇和異丙醇作為萃取試劑的樣品不能進(jìn)行液相分析，對(duì)乙酸、乙腈、甲醇為萃取試劑處理的樣品進(jìn)行液相檢測(cè)。結(jié)果如圖4所示，甲醇為萃取試劑得到的藏紅花酸濃度平均值為69.65 μg/g，乙腈為萃取試劑得到的藏紅花酸濃度平均值為65.52 μg/g，乙酸為萃取試劑得到的藏紅花酸濃度平均值為62.79 μg/g。

因此甲醇的萃取能力最強(qiáng)，為液液萃取的最優(yōu)萃取試劑，亦即固相萃取中的最優(yōu)洗脫劑。

2.5 萃取試劑/洗脫劑濃度對(duì)提取梔子油中藏紅花酸影響

以70%甲醇為萃取試劑得到的樣品出現(xiàn)部分乳化現(xiàn)象，樣品較渾濁，透光度低，不能進(jìn)行液相分析。隨著甲醇濃度升高，溶液逐漸清晰，透光度變好，90%和100%甲醇萃取得到的樣品都較清晰。如圖5所示，100%甲醇的萃取能力最強(qiáng)，為液液萃取的最優(yōu)萃取試劑濃度，亦即固相萃取中的最優(yōu)洗脫劑濃度。

2.6 溫度對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響（超聲輔助液液萃?。?/p>

在上述篩選出的最優(yōu)條件下（以DMF為溶油試劑，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇為萃取試劑），進(jìn)一步對(duì)可能的影響因素，即超聲溫度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果如圖6所示，藏紅花酸含量隨溫度的增加呈現(xiàn)出先下降后上升的變化趨勢(shì)，然而，總體上，改變溫度對(duì)提取藏紅花酸的影響不大。因此，從節(jié)約能耗、簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作、提高檢測(cè)效率角度考慮，超聲輔助液液萃取可在常溫下進(jìn)行。

2.7 時(shí)間對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響（超聲輔助液液萃?。?/p>

在上述篩選出的最優(yōu)超聲輔助液液萃取條件下（以DMF為溶油試劑，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇為萃取試劑），進(jìn)一步對(duì)可能的另一個(gè)影響因素，即超聲時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)溫度為30 ℃，結(jié)果如圖7所示，總體上，改變時(shí)間對(duì)提取藏紅花酸的影響都不大。因此，從節(jié)約時(shí)間成本、提高檢測(cè)效率角度考慮，超聲輔助液液萃取可在2 min條件下進(jìn)行。

2.8 萃取次數(shù)對(duì)提取梔子油中藏紅花酸的影響（超聲輔助液液萃?。?/p>

在上述篩選出的最優(yōu)超聲輔助液液萃?。ㄒ訢MF為溶油試劑，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇為萃取試劑，常溫，超聲萃取2 min）條件下，進(jìn)一步對(duì)可能影響藏紅花酸提取效果的因素，即萃取次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。如圖8所示，隨著萃取次數(shù)的增多，藏紅花酸含量?jī)H略微增加。出于提高效率、節(jié)約成本和時(shí)間角度考慮，萃取1次為最優(yōu)條件。

綜上所述：將2種前處理方法（超聲輔助液液萃取和固相萃?。┑淖顑?yōu)條件及最優(yōu)條件下獲得的的藏紅花酸含量進(jìn)行比較，結(jié)果如表1所示，超聲輔助液液萃取優(yōu)于固相萃取。因此，超聲輔助液液萃取為篩選出的最優(yōu)前處理方法，9組平行樣本檢測(cè)到的梔子油中藏紅花酸含量的平均值為69.65 μg/g（RSD=4.45%）。

2.9 加標(biāo)回收率

選擇超聲輔助液液萃取為最終前處理手段，并在上述最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。分別吸取1.2.1配置的12 μg/mL藏紅花酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100、200、300 μL，其對(duì)應(yīng)的濃度分別為0.12、0.24、0.36 μg/mL。每一添加水平的樣品數(shù)為3個(gè)。先測(cè)定樣品原香菜籽油中藏紅花酸的本底含量，再測(cè)定加標(biāo)后藏紅花酸的含量，計(jì)算加標(biāo)回收率。得到平均加標(biāo)回收率為86.61%，平均RSD=1.16%。表明該方法具有較好的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)梔子油中藏紅花酸的準(zhǔn)確定量。

3 結(jié)論

藏紅花酸作為梔子油中的重要微量營(yíng)養(yǎng)成分，很可能成為評(píng)價(jià)梔子油品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)。因此，文章對(duì)梔子油中藏紅花酸的提取及HPLC檢測(cè)方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究。首先利用HPLC建立藏紅花酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程y=115356x—26489，R2=0.9996，線性關(guān)系良好，檢出限低至0.21 μg/mL，定量限低至0.7 μg/mL。然后篩選得到超聲輔助液液萃取為最優(yōu)提取方式；選用DMF為溶油試劑，料液比0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇為萃取試劑，室溫超聲2 min，萃取1次，9組平行樣本檢測(cè)得到藏紅花酸的平均值為（69.65±3.17）μg/g（RSD=4.45%），平均加標(biāo)回收率為86.61%（平均RSD%=1.16%）。

該方法操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、耗能低、準(zhǔn)確性高、穩(wěn)定性好，可以實(shí)現(xiàn)梔子油中藏紅花酸的快速、準(zhǔn)確定量，為從梔子中提取藏紅花酸方面的研究提供了方法學(xué)基礎(chǔ)，對(duì)梔子油的功能性開發(fā)及應(yīng)用具有重要價(jià)值和意義。

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