中藥血清藥物化學(xué)是通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口服給藥后的含藥血清進(jìn)行分析，對(duì)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及復(fù)方配伍機(jī)制進(jìn)行快速篩選的一項(xiàng)新型技術(shù)，在中藥質(zhì)量控制、中藥炮制研究等領(lǐng)域都發(fā)揮重要作用。隨著不斷的發(fā)展創(chuàng)新，將其與血清藥理學(xué)、藥動(dòng)學(xué)等學(xué)科相互融合，為中藥及復(fù)方的研究提供了更加完善的手段。對(duì)中藥血清藥物化學(xué)的主要技術(shù)手段、應(yīng)用研究及其與一些學(xué)科的聯(lián)合使用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，為中藥血清藥物化學(xué)的發(fā)展提供新的研究思路。

中藥血清藥物化學(xué)是以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口服給藥一段時(shí)間后，除去內(nèi)源性蛋白等雜質(zhì)的血清為研究對(duì)象，應(yīng)用液相、質(zhì)譜等現(xiàn)代分離鑒定技術(shù)對(duì)其中所含成分進(jìn)行分析，從而推測(cè)藥物發(fā)揮藥效的活性成分及其在體內(nèi)的代謝過(guò)程。自1997年血清藥物化學(xué)這一概念在國(guó)內(nèi)提出后，不僅彌補(bǔ)了當(dāng)時(shí)國(guó)內(nèi)藥物體內(nèi)代謝研究的空白，為中醫(yī)藥的現(xiàn)代研究提供了新的研究思路和方法，也因其對(duì)藥物體內(nèi)外成分差異的直觀呈現(xiàn)而迅速發(fā)展起來(lái)。經(jīng)過(guò)20年專(zhuān)家學(xué)者的共同努力，血清藥物化學(xué)不僅取得了豐富的學(xué)術(shù)研究成果，其相關(guān)的理論思想及技術(shù)手段也隨之崛起，本文將對(duì)近年來(lái)血清藥物化學(xué)的應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述并分析，為其日后在中醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展提供思路和啟發(fā)。

1 血清藥物化學(xué)的技術(shù)手段

1.1 動(dòng)物血清處理手段

動(dòng)物血清樣品中含有多種內(nèi)源性蛋白質(zhì)，會(huì)嚴(yán)重干擾血中移行成分的檢測(cè)，故除去蛋白是血液在進(jìn)行分析之前的重要步驟。但由于血清樣品受內(nèi)源性雜質(zhì)多、樣品量較小等因素的影響，除蛋白后待測(cè)成分含量可能在檢測(cè)限之下，為了提高檢測(cè)靈敏度，也可采用一些方法對(duì)樣品進(jìn)行純化富集。對(duì)近年來(lái)文獻(xiàn)報(bào)道的血清處理手段進(jìn)行總結(jié)分析，發(fā)現(xiàn)常用的血清處理方法為溶劑法，通過(guò)在樣品中加入有機(jī)試劑、重金屬鹽或強(qiáng)酸溶液，使蛋白質(zhì)變性或減小蛋白質(zhì)溶解度而除去蛋白；富集純化最常用的方法為萃取法，是利用待測(cè)成分與雜質(zhì)在溶劑中的分配系數(shù)或在固定相上的吸附能力差異，將待測(cè)成分與雜質(zhì)進(jìn)行分離。實(shí)驗(yàn)時(shí)，要針對(duì)不同的藥物屬性，選擇不同的處理方法，使雜質(zhì)對(duì)待測(cè)成分的干擾降到最小。有時(shí)，為了提高待測(cè)成分的濃度，也可將不同個(gè)體的血清樣品進(jìn)行混合，同時(shí)達(dá)到減小個(gè)體差異的目的。

1.2 血清分析手段

含藥血清需采用現(xiàn)代技術(shù)手段進(jìn)行分析，常用的有液相色譜法（HPLC）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）、超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）等。

HPLC法為血清藥物化學(xué)最基本最常用的方法，通過(guò)建立藥物體內(nèi)外指紋圖譜，并與單味藥、陰性藥指紋圖譜進(jìn)行比較，確定入血成分并進(jìn)行歸屬，然后通過(guò)對(duì)照品進(jìn)行指認(rèn)，但由于樣品量少且濃度較低，為防止體內(nèi)成分的人為遺漏，迫切需要應(yīng)用分離度和靈敏度更高的技術(shù)手段，現(xiàn)在多數(shù)研究會(huì)選擇使用UPLC。

液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是將高分離能力的液相色譜與高檢測(cè)能力的質(zhì)譜進(jìn)行有效結(jié)合，這種方法可直接得到樣品的保留時(shí)間、質(zhì)核比、碎片離子等信息，可直接通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比及文獻(xiàn)查閱等方法對(duì)不同圖譜中的差異性物質(zhì)進(jìn)行推測(cè)，同時(shí)獲得原型成分及代謝產(chǎn)物的成分信息，從而進(jìn)一步推測(cè)藥物在體內(nèi)的代謝途徑，金華等采用UPLC-ESI-MS技術(shù)對(duì)金芪降糖片中16種入血的原型成分進(jìn)行了確認(rèn)，覃小麗等[12]采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)明確了黑骨藤提取物的17種血中移行成分，這些都為闡明藥物的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)彌補(bǔ)了HPLC用對(duì)照品進(jìn)行一一比對(duì)的操作繁瑣且沒(méi)有目的性的缺陷。此外，一些系統(tǒng)自帶的軟件也可應(yīng)用于中藥體外化學(xué)成分和體內(nèi)原型成分或代謝產(chǎn)物的快速篩選和綜合分析，達(dá)到事半功倍之效。

2 血清藥物化學(xué)的研究應(yīng)用

2.1 明確中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制

中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究是中藥現(xiàn)代化研究的核心途徑，中藥大都為天然藥物，具有多成分、多途徑、多靶點(diǎn)的治療特性，其成分種類(lèi)復(fù)雜且數(shù)目繁多，中藥進(jìn)入人體后，成分與成分之間的相互作用、成分與機(jī)體之間的相互作用均為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究增加了重重阻礙。血清藥物化學(xué)基于入血成分及其代謝產(chǎn)物才是發(fā)揮藥效的活性成分的思想基礎(chǔ)，藥物經(jīng)過(guò)胃腸道代謝后成分種類(lèi)與數(shù)目大大減少，簡(jiǎn)化了中藥研究的復(fù)雜性，只對(duì)入血成分進(jìn)行分析，從而明確藥物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制。例如刺五加體外樣品中可以分離得到131個(gè)成分，而灌胃后的血清樣品中僅得到了12個(gè)原型成分及9個(gè)代謝成分；小柴胡湯加減提取物中共鑒定出63個(gè)化合物，而在血清中僅得到6種原型成分和2種代謝產(chǎn)物，都在大大減小工作量的同時(shí)對(duì)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行了最快速有效的篩選?；ㄇ嗨?7-葡萄糖苷、番瀉苷A、蘆薈大黃素和大黃酸可能為七味消炎湯抗菌、抗炎的生物活性成分，甲基偽麻黃堿、苯甲酰安息香堿、苯甲?；鶠躅^堿和美沙康堿可能為麻黃附子細(xì)辛湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，這些均通過(guò)血清藥物化學(xué)得以證明。

2.2 闡明中藥炮制理論

中藥在使用前常根據(jù)其用藥目的或調(diào)劑、制劑的不同要求而進(jìn)行炮制，使藥物的理化性質(zhì)發(fā)生變化，從而達(dá)到不同的藥用目的，但是其發(fā)生化學(xué)變化、產(chǎn)生不同藥效作用的機(jī)制尚不能完全清楚，且藥效變化與成分變化之間的關(guān)聯(lián)性也缺乏依據(jù)。Wang等建立了一種基于液-質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的方法，用于篩選和分析正常和急性血瘀大鼠口服生大黃或酒大黃后血清中吸收的生物活性成分和代謝產(chǎn)物，初步鑒定了16種化合物，主要包括II期代謝物。首次從血清藥物化學(xué)水平探討了中藥炮制所致藥理作用變化的可能解釋。而后又有學(xué)者陸續(xù)對(duì)百部蜜炙、山茱萸酒炙進(jìn)行了血清藥物化學(xué)研究，為其藥理作用及作用機(jī)制提供了依據(jù)。血清藥物化學(xué)為中藥炮制機(jī)制的研究提供了可靠的研究思路及技術(shù)手段。

2.3 闡明中藥復(fù)方配伍機(jī)制

中藥復(fù)方為中醫(yī)藥治療的重要手段，以整體觀為核心，遵循君臣佐使的原則，將不同的藥物配合使用達(dá)到治療的目的，雖然其臨床療效在長(zhǎng)期的實(shí)踐中已取得大眾的認(rèn)可，但關(guān)于中藥復(fù)方藥味之間復(fù)雜的相互作用并不能僅僅依靠傳統(tǒng)中醫(yī)理論來(lái)說(shuō)服大家。陳丹陽(yáng)等對(duì)腎康方全方及方中各味藥物的含藥血清圖譜進(jìn)行了分析，明確了復(fù)方中的入血成分并不是各藥味入血成分的簡(jiǎn)單相加。中藥血清藥物化學(xué)可以對(duì)入血成分進(jìn)行全面的分析，基于血中移行成分之間彼此消長(zhǎng)的規(guī)律，對(duì)復(fù)方在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過(guò)程進(jìn)行推測(cè)，揭示藥物在體內(nèi)的代謝過(guò)程和復(fù)方的作用機(jī)制，更加深刻的詮釋復(fù)方配伍的科學(xué)性、合理性。李驊對(duì)雙丹方的組方機(jī)制進(jìn)行了研究，以丹參中的主要成分丹參素配伍丹皮中的主要成分丹皮酚對(duì)原方進(jìn)行模擬，表明二者配伍具有顯著的心肌損傷的保護(hù)作用，且丹參素能使丹皮酚吸收入血加快，作用時(shí)間延長(zhǎng)，在心、腦等靶組織中的濃度也顯著提升，揭示了雙丹方的配伍機(jī)制。此外，六味地黃丸、酸棗仁湯、茵陳蒿湯等方劑的配伍機(jī)制也通過(guò)不同配伍方式的血清藥物化進(jìn)行了研究。

2.4 建立中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中藥有效成分復(fù)雜，單一成分的定性、定量分析方法并不能全面的反映其臨床功效，且中藥質(zhì)控指標(biāo)與其臨床功效之間也缺乏明確的關(guān)聯(lián)性，這些都阻礙了我國(guó)中藥質(zhì)量控制體系為國(guó)際社會(huì)所認(rèn)可。Zhang等為了更有效合理的控制三子固本顆粒的質(zhì)量，對(duì)其進(jìn)行了血清藥化研究，發(fā)現(xiàn)15批樣品口服給藥后血液中均檢測(cè)出沒(méi)食子酸和車(chē)前草素，表明了這兩種成分作為三子固本顆粒劑質(zhì)量控制的生物標(biāo)志物的合理性。Chen等通過(guò)對(duì)黃芪顆粒的含藥血清進(jìn)行分析，認(rèn)為花青素-7-O-β-D-葡萄糖苷、降鈣素、花青素、黃芪皂苷Ⅳ和香豆素可能具有藥理活性，確定為黃芪顆粒質(zhì)量控制的生物標(biāo)志物，并建立了一種簡(jiǎn)便、快速、高效的HPLC-DAD-ELSD法同時(shí)測(cè)定這5種成分。在血清藥物化學(xué)對(duì)中藥的有效成分進(jìn)行確認(rèn)的基礎(chǔ)上建立中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，可以提高中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)性和有效性，使我國(guó)中藥質(zhì)量控制體系走向國(guó)際化。

2.5 促進(jìn)新藥的開(kāi)發(fā)

以經(jīng)典方劑為基礎(chǔ)，根據(jù)不同的癥狀進(jìn)行加減藥味，或以現(xiàn)有方劑為基礎(chǔ)，進(jìn)行處方優(yōu)化，或在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上對(duì)動(dòng)植物藥和礦物藥的有效部位或有效成分進(jìn)行提取純化研發(fā)新藥，均是新藥開(kāi)發(fā)的重要手段。中藥血清藥化可以對(duì)藥物的有效成分進(jìn)行最直觀的體現(xiàn)，可以為新藥的開(kāi)發(fā)提供一條最為便捷的途徑。以王喜軍為核心的團(tuán)隊(duì)在血清藥物化學(xué)的基礎(chǔ)上利用大孔樹(shù)脂對(duì)越橘的入血成分進(jìn)行定向制備，獲得的有效部位群可測(cè)成分達(dá)70%以上，用于治療急慢性呼吸系統(tǒng)的感染，并以此為基礎(chǔ)申報(bào)了五類(lèi)新藥。

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