食品添加劑是現(xiàn)代食品工業(yè)中不可缺少的一部分，人工合成色素、甜味劑和防腐劑作為重要的食品添加劑被廣泛應(yīng)用于食品生產(chǎn)加工。但是，隨著其在食品行業(yè)的廣泛使用，違規(guī)及超限量使用事件時(shí)有發(fā)生，所帶來(lái)的食品安全問(wèn)題也日益凸顯，安全監(jiān)管問(wèn)題已被列入食品安全整頓工作的重要內(nèi)容。隨著人們生活水平的提高及對(duì)健康的關(guān)注，葡萄酒慢慢取代了酒精度較高的白酒，成為了很多宴請(qǐng)和聚餐的“新寵”，消費(fèi)量呈現(xiàn)日益增長(zhǎng)的趨勢(shì)，但葡萄酒市場(chǎng)仍有不少違法使用添加劑或者添加劑超標(biāo)的現(xiàn)象，甚至有不法商販利用香精、色素、酒精、甜味劑等添加劑進(jìn)行勾兌，制造假冒偽劣葡萄酒產(chǎn)品，擾亂葡萄酒市場(chǎng)，危害消費(fèi)者健康。

近年來(lái)，國(guó)家有關(guān)部門在對(duì)全國(guó)葡萄酒的抽檢過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，濫用添加劑現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，因此葡萄酒中違規(guī)使用的添加劑也成為國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢的重點(diǎn)項(xiàng)目。隨著我國(guó)食品安全監(jiān)管水平的提升，為提高工作效率，方便監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)對(duì)葡萄酒中防腐劑、甜味劑和色素的日常監(jiān)測(cè)，開(kāi)發(fā)靈敏度高、適用性廣的高通量檢測(cè)方法以有效地應(yīng)對(duì)添加劑在葡萄酒中的濫用，以及應(yīng)對(duì)突發(fā)食品安全事件具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

為保障食品安全，需要對(duì)葡萄酒中食品添加劑的含量進(jìn)行檢測(cè)。目前，國(guó)標(biāo)有針對(duì)葡萄酒中防腐劑、色素和甜味劑等的檢測(cè)方法，但這些標(biāo)準(zhǔn)大都針對(duì)單一或某幾種食品添加劑，且樣品的預(yù)處理方法各不相同，對(duì)于葡萄酒中多種添加劑則需要逐一測(cè)定，程序繁雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，效率很低，在進(jìn)行批量樣品檢測(cè)時(shí)，需要大量的人力物力。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于葡萄酒中防腐劑、甜味劑和色素檢測(cè)方法的文獻(xiàn)報(bào)道很多，主要采用離子色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜、高效液相色譜質(zhì)譜法等，雖然相關(guān)檢測(cè)方法的報(bào)道很多，在檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度方面均有所提高，但經(jīng)文獻(xiàn)檢索，大多只針對(duì)某一類添加劑進(jìn)行檢測(cè)，不利于對(duì)葡萄酒中多類添加劑的大規(guī)模篩查。另外，包括我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)在內(nèi)，目前最為普遍的分析方法為液相色譜法，該方法不能提供目標(biāo)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息，抗干擾能力相對(duì)較弱，在實(shí)際樣品分析時(shí)容易受到基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽(yáng)性現(xiàn)象。

液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)能夠在一定程度上降低基質(zhì)干擾，對(duì)于需要高靈敏度、寬適用范圍的檢測(cè)工作而言，已成為最佳的手段之一，逐漸應(yīng)用于添加劑的檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，利用高效液相色譜的強(qiáng)分離能力和質(zhì)譜準(zhǔn)確定性、高選擇性和高靈敏度的特點(diǎn)，在較短的時(shí)間內(nèi)即可完成多組分的分離鑒定，建立了一種可同時(shí)測(cè)定并能夠準(zhǔn)確定性定量葡萄酒中防腐劑、甜味劑和色素的方法。

一、材料與方法

1、材料、試劑與儀器

葡萄酒樣：購(gòu)自零售超市和商店。

儀器設(shè)備：LCMS-8050高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（日本Shimadzu公司，具體配置為L(zhǎng)C20ADXR×2輸液泵，DGU-20A3R在線脫氣機(jī)，SIL20AXR自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutionsVer.5.91色譜工作站）；Milli-QReference超純水器（美國(guó)Millipore公司）；超聲波清洗器（KQ-500DE，昆山超聲儀器有限公司）；AcquityUPLCHSST₃柱（100mm×2.1mm,1.8µm，美國(guó)Waters公司）；0.22μm尼龍濾膜（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。

試劑：甲醇、乙腈、乙酸、乙酸銨（HPLC級(jí)，Dikma公司）；甜蜜素（Sodiumcycamate）、安賽蜜（Acesulfame-K）、糖精鈉（Saccharinsodium）、阿斯巴甜（Aspartame）、三氯蔗糖（Sucralose）、甜菊糖苷（Stevioside）、紐甜（Neotame）、阿力甜（Alitame）；誘惑紅（Allurared）、赤蘚紅（Erythrosine）、莧菜紅（Amaranth）、胭脂紅（Carmine）、檸檬黃（Tartrazine）、日落黃（Sunsetyellow）、亮藍(lán)（Brilliantblue）；脫氫乙酸（Dehydroaceticacid），美國(guó)Sigma-Aldrich公司，加拿大TRC公司和德國(guó)Dr.EhrenstorferGmbH公司，純度≥95%。

2、實(shí)驗(yàn)方法

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
分別準(zhǔn)確稱取16種添加劑標(biāo)準(zhǔn)品于10mL棕色容量瓶中，用水或甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為1mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液，于-18℃下避光保存。用甲醇稀釋并配制中間濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃避光保存。根據(jù)需要用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，配制成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）樣品前處理方法

取葡萄酒樣品2.0mL于10mL容量瓶中，用超純水定容，超聲混勻，過(guò)0.22μm濾膜，濾液供測(cè)定。

（3）色譜條件

色譜柱：AcquityUPLCHSST3柱（100mm×2.1mm,1.8µm，美國(guó)Waters公司）。流動(dòng)相：（A）甲醇和（B）10mmol/L乙酸銨水溶液，流速0.35mL/min；梯度洗脫程序?yàn)椋?min，甲醇的體積分?jǐn)?shù)為10%；0～3min，甲醇的體積分?jǐn)?shù)從10%升至90%，并保持2.5min，5.5～5.51min；甲醇的體積分?jǐn)?shù)從90%降至10%；5.51min～6.5min，甲醇的體積分?jǐn)?shù)保持10%。柱溫為35℃；進(jìn)樣體積：2μL。

（4）質(zhì)譜條件

分析儀器：LCMS-8050；離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正負(fù)離子同時(shí)掃描；離子源接口電壓：0.5kV；霧化氣：氮?dú)?.0L/min；干燥氣：氮?dú)?0L/min；碰撞氣：氬氣；DL溫度：250℃；加熱模塊溫度：400℃；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；駐留時(shí)間：15ms；延遲時(shí)間：3ms；16種添加劑標(biāo)準(zhǔn)品MRM參數(shù)見(jiàn)表1。

二、結(jié)果與討論

1、樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

與其他分析手段不同，質(zhì)譜分析往往存在一定的基質(zhì)效應(yīng)，當(dāng)使用ESI源時(shí)，在離子化過(guò)程中基質(zhì)組分與目標(biāo)物競(jìng)爭(zhēng)，更易出現(xiàn)基質(zhì)抑制效應(yīng)。減少基質(zhì)效應(yīng)的方法通常有稀釋樣品溶液、增加凈化步驟、配制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液等。本研究采用直接進(jìn)樣方式進(jìn)行分析，以避免傳統(tǒng)的液液萃取、固相萃取方法回收率低、重復(fù)性差，且會(huì)使用大量溶劑的弊端，但考慮到葡萄酒中含有一定比例乙醇和糖類，為減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定的影響，需對(duì)樣品進(jìn)行稀釋處理。稀釋的方法可以降低乙醇對(duì)色譜峰形影響，減弱基質(zhì)效應(yīng)，但是會(huì)降低方法的檢出限。經(jīng)過(guò)對(duì)主流品牌的葡萄酒分別稀釋2～15倍進(jìn)行檢測(cè)，不同稀釋倍數(shù)樣品測(cè)試對(duì)比，最終確定稀釋倍數(shù)為5倍。

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