2石斛堿含量分布規(guī)律

作為金釵石斛總生物堿中最主要的特征性成分，石斛堿占金釵石斛總生物堿含量的92%以上。隨著對(duì)石斛堿研究的深入，在越來(lái)越多的石斛屬植物中檢測(cè)到石斛堿的存在，其含量主要受到石斛種類(lèi)、植株部位、栽培條件、采收期及加工方式等多方面的影響。

2.1不同石斛種類(lèi)對(duì)石斛堿的影響

王曉媛等比較了石斛屬6種石斛主要化學(xué)成分差異，包括線葉石斛(D.aurantiacum Rchb.f.)、蜻蜓石斛(D.pulchellum)、杓唇石斛［D.moschatum(Buch.-Ham.)Sw.］、疊鞘石斛(D.denneanum Kerr.)、流蘇石斛(D.fimbriatum Hook.)以及細(xì)葉石斛(D.han-cockii Rolfe)，采集部位為1年生莖段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅在線葉石斛中檢測(cè)到石斛堿存在，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02%，低于《中國(guó)藥典》規(guī)定。陳志輝等運(yùn)用TLC對(duì)疊鞘石斛、流蘇石斛、金釵石斛的化學(xué)成分進(jìn)行比較鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅在金釵石斛中檢測(cè)出石斛堿色譜斑點(diǎn)，而流蘇石斛和疊鞘石斛中未發(fā)現(xiàn)石斛堿色譜斑點(diǎn)；李振堅(jiān)等研究表明，目前僅石斛屬4個(gè)種中發(fā)現(xiàn)含有石斛堿，包括金釵石斛、矩唇石斛(D.linawianum Rchb.f.)、棒節(jié)石斛(D.findleyanum Par.et Rchb.f.)以及線葉石斛，鐵皮石斛(D.officinale Kimura et Migo)作為石斛市場(chǎng)的主流產(chǎn)品，雖然對(duì)其研究比較多，但是并未檢測(cè)到石斛堿的存在。陳曉梅等研究也表明，在鐵皮石斛中未能檢測(cè)出石斛堿，而石斛堿在金釵石斛中具有較高的含量；此外，HPLC-MS分析結(jié)果顯示，鐵皮石斛中總堿含量低、生物堿類(lèi)化合物數(shù)量少。但近幾年，有相關(guān)研究報(bào)道稱在鐵皮石斛中檢測(cè)分離到石斛堿，如李海濤等從云南產(chǎn)鐵皮石斛組培苗中提取到石斛堿，提取率分別為根(0.06%)、莖(0.34%)、葉(0.00%)；徐德林等對(duì)采集到的9個(gè)來(lái)自云南和浙江不同石斛樣品中石斛堿含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同石斛種之間的石斛堿含量具有較大的差異。其中，金釵石斛干燥莖中石斛堿含量均高于6.0 mg/g，而鐵皮石斛中石斛堿含量?jī)H為金釵石斛的12%～46%；楊洋等、葛穎華等也在鐵皮石斛中檢測(cè)到石斛堿的存在。在其他研究相對(duì)較少的石斛品種中，也發(fā)現(xiàn)了石斛堿的存在。如姚春等對(duì)燈籠石斛組的7個(gè)石斛品種進(jìn)行化學(xué)成分測(cè)定，發(fā)現(xiàn)在密花石斛(D.densiflorum Lindl.)(0.07%)和聚石斛(D.lindleyi Stendel)(0.02%)中檢測(cè)到石斛堿的存在，且含量較低。

隨著人工組培技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于石斛品種的道地性產(chǎn)生了一定的沖擊和影響，加之石斛種類(lèi)繁多、種質(zhì)混雜，故造成以上現(xiàn)象的產(chǎn)生。筆者建議，未來(lái)可加大對(duì)于石斛品種鑒定的研究力度，如生物學(xué)特性分析、特征指紋圖譜構(gòu)建以及DNA條形碼鑒定等；同時(shí)，在結(jié)合對(duì)石斛道地性的考慮分析基礎(chǔ)上，規(guī)范石斛組培技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化，保障石斛組培苗質(zhì)量。

2.2不同植株部位對(duì)石斛堿的影響

莖作為石斛的入藥部位，富含豐富的石斛堿，而研究表明，在金釵石斛的葉片、花和根中也檢測(cè)到石斛堿的存在。王憲楷等對(duì)栽培在10種木本植物上以及生長(zhǎng)于石縫間的金釵石斛中石斛堿的含量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)石斛堿含量莖＞葉的石斛栽培附生植物為烏柏、油桐、柿、楓楊、李和四川虎皮楠，莖＜葉的有棗、杏、香椿和梨，而石縫間野生的金釵石斛中石斛堿含量最高，分別為莖中含石斛堿(3.18%)、葉(0.83%)、根(0.08%)；胡志剛等研究發(fā)現(xiàn)，貴州赤水金釵石斛中石斛堿的含量分布規(guī)律為莖(0.63%)＞花(0.45%)；李華云等研究發(fā)現(xiàn)，四川瀘州和貴州赤水產(chǎn)的金釵石斛，只有莖中的石斛堿含量符合《中國(guó)藥典》規(guī)定，而葉和根中的石斛堿含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)?？傮w來(lái)說(shuō)，石斛莖中石斛堿含量較石斛其他部位的含量高，再一次佐證了傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)以及《中國(guó)藥典》中以石斛莖入藥的依據(jù)。

2.3不同栽培條件對(duì)石斛堿的影響

目前對(duì)于石斛屬植物的主要栽培方式可分為野生栽培、仿野生栽培以及人工溫室種植三大類(lèi)型。徐曉林等對(duì)采集自17個(gè)不同地區(qū)的野生金釵石斛中石斛堿的含量進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，廣西百色產(chǎn)金釵石斛中石斛堿含量高于其他地區(qū)，云南、貴州以及緬甸地區(qū)產(chǎn)金釵石斛中石斛堿含量差異較小，而西藏、四川以及海南地區(qū)金釵石斛中石斛堿含量未能達(dá)到藥典規(guī)定的0.40%；李文濤等利用偏最小二乘回歸法(PLS)對(duì)16份采集自不同省份的金釵石斛中化學(xué)成分及其與生態(tài)因子的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果表明，石斛堿含量為貴州(0.28 mg/g)＞廣西(0.25 mg/g)＞云南(0.24 mg/g)＞四川(0.23mg/g)。年降水量與石斛堿含量呈最大正相關(guān)性，其次為日照時(shí)長(zhǎng)；土壤類(lèi)型與石斛堿含量呈最大負(fù)相關(guān)，其次為濕度。VIP直方圖表明，土壤類(lèi)型(1.730)、年降水量(1.592)和年均溫(1.041)的權(quán)重系數(shù)＞1，為影響石斛堿含量積累的主導(dǎo)因子；李在軍等研究發(fā)現(xiàn)，林下仿野生環(huán)境栽培的金釵石斛中石斛堿含量(0.18%)高于溫室內(nèi)栽培的石斛(0.15%)；王憲楷等研究發(fā)現(xiàn)，石縫間野生的金釵石斛中石斛堿含量較高，優(yōu)于樹(shù)上栽培的石斛；任紅等研究發(fā)現(xiàn)，金釵石斛中石斛堿的含量分布為仿野生貼石栽培(0.82%)＞仿野生貼樹(shù)(0.60%)＞大棚離地床栽(0.53%)，這一結(jié)果與王憲楷研究結(jié)果相一致；牛曉娟等研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)天數(shù)、初始pH以及搖床轉(zhuǎn)速均能對(duì)金釵石斛懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中的石斛堿含量產(chǎn)生一定的影響。

Jin-ling Li等對(duì)培養(yǎng)在溫室中不同培養(yǎng)條件下的金釵石斛中石斛堿含量進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，石斛莖中石斛堿含量在光照強(qiáng)度為75.02%時(shí)達(dá)到最高，而石斛葉片中石斛堿的含量在光照強(qiáng)度為39.74%時(shí)達(dá)到最高；魏明等研究發(fā)現(xiàn)，硝酸鑭濃度為5.0 mg/L時(shí)，可提高金釵石斛中多糖和石斛堿的含量；倪竹君等研究發(fā)現(xiàn)，石斛組培苗經(jīng)5-氮雜胞苷(5-azaC)處理后，其石斛堿含量在每克干重材料中的占比在處理60 d和90 d后，分別達(dá)到0.17 mg/g和0.18 mg/g，為對(duì)照組的1.5、1.6倍；薛敏等［42］研究發(fā)現(xiàn)，利用不同種類(lèi)的葉面肥對(duì)金釵石斛幼苗進(jìn)行噴施處理之后，石斛莖中石斛堿含量依次為沼液肥(0.23%)＞葉面肥1(0.17%)＞葉面肥2(0.14%)＞多元素復(fù)合肥(0.13%)，與對(duì)照組(清水處理，0.09%)相比，分別增加石斛堿含量:155.56%、88.89%、55.56%、44.44%。由此可見(jiàn)，藥用石斛屬植物的產(chǎn)地、生態(tài)環(huán)境因子(土壤類(lèi)型、年降水量、年均溫、日照時(shí)長(zhǎng)、濕度等)、附生基質(zhì)(巖壁、數(shù)載、棚栽等)以及人工栽培時(shí)的培養(yǎng)條件(光照強(qiáng)度、肥料、培養(yǎng)溫度、稀土元素、DNA化學(xué)修飾等)均能對(duì)其藥效成分產(chǎn)生一定的影響。

2.4不同采收期對(duì)石斛堿的影響

《中國(guó)藥典》中注明，金釵石斛、鼓槌石斛(D.chrysotoxum)、流蘇石斛及其近似種的新鮮或干燥莖全年均可采收，而建議鐵皮石斛的干燥莖在11月至翌年3月進(jìn)行采收，不同采收期會(huì)對(duì)石斛屬植物中活性成分的含量產(chǎn)生一定的影響。蔡偉等比較測(cè)定同一產(chǎn)地金釵石斛莖中石斛堿含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1年生(0.55%)＞2年生(0.40%)＞4年生(0.36%)＞3年生(0.35%)；劉楊等研究發(fā)現(xiàn)，1年生金釵石斛莖中石斛堿含量最高(0.90%)，第2年進(jìn)入生長(zhǎng)期之后，其含量開(kāi)始逐漸下降，最低為0.40%；顏壽等研究發(fā)現(xiàn)，四川省合江縣產(chǎn)的不同生長(zhǎng)年限金釵石斛中石斛堿的含量依次為1年生(0.48%)＞2年生(0.44%)＞3年生(0.22%)。從石斛的采收月份來(lái)看，蔡莉等研究發(fā)現(xiàn)，貴州省赤水市旺隆鎮(zhèn)鴨嶺村和紅花村產(chǎn)的2年生金釵石斛莖中石斛堿含量在12月均達(dá)到最高值，分別為0.70%和0.64%，在8月(0.40%)和9月(0.41%)達(dá)到最低值；李金玲研究發(fā)現(xiàn)，1年生金釵石斛莖中石斛堿含量變化波動(dòng)較大，出現(xiàn)了2次升高:第一次是在3—6月，石斛堿含量發(fā)生迅速的升高；第二次是在10—12月，石斛堿含量緩慢地升高；2年生金釵石斛莖中石斛堿含量在11月已超過(guò)《中國(guó)藥典》規(guī)定的0.40%、12月含量為0.49%、翌年1月含量超過(guò)0.50%，而2月含量卻低于0.40%。

總體來(lái)說(shuō)，相比于其他年份采收的石斛屬植物而言，1年生該屬植物中石斛堿含量最高，具有較高的藥用價(jià)值。但是，由于人工栽培的石斛屬植物生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，石斛堿含量隨生長(zhǎng)時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律還有待進(jìn)一步的深入研究。故而，在確定石斛屬植物的合理采收期時(shí)，不應(yīng)該僅僅以多糖、生物堿或石斛堿等某個(gè)單一指標(biāo)來(lái)確定，應(yīng)結(jié)合石斛生長(zhǎng)特性以及干物質(zhì)的積累量、藥效成分含量等多項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合考慮。

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