試驗(yàn)中，實(shí)際加入的對(duì)照品為維生素E醋酸酯（加入量為8.5132mg），折算成維生素E（以α-生育酚計(jì)）的量為7.76mg，折算方法：維生素E（以α-生育酚計(jì)）/mg含量=維生素E醋酸酯/mg×430.71/472.75（其中，430.71為α-生育酚的分子量，472.75為DL-α-醋酸生育酚（即維生素E醋酸酯）分子量，參考標(biāo)準(zhǔn)GB1886.233—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑維生素E》）。

5、中間精密度試驗(yàn)

稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物6份，每份約100mg，精密稱定，精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。選用不同色譜柱、不同高效液相色譜儀分別測(cè)定樣品中原花青素與維生素E含量，然后分別對(duì)兩組分6個(gè)含量數(shù)據(jù)進(jìn)行相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差統(tǒng)計(jì)，得到兩組分含量的RSD均小于1.5％，表明使用該方法中間精密度良好（見(jiàn)表4）。

6、加標(biāo)回收率試驗(yàn)

稱取已知原花青素與維生素E含量的葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物約50mg，共6份，精密稱定，向樣品中加入原花青素與維生素E醋酸酯混合對(duì)照品貯備液（原花青素5.435lmg/mL，維生素E醋酸酯2.1283mg/mL）4mL，精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，DikmaDiamons訂C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。測(cè)得原花青素與維生素E兩組分的加標(biāo)回收率平均值分別為95.4％、99.0％，RSD分別為2.3％、1.2％，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5、表6，表明使用本方法檢測(cè)回收率較高，準(zhǔn)確度良好，結(jié)果可靠。

7、樣品含量測(cè)定

稱取3批葡萄籽維生素E軟膠囊內(nèi)容物約100mg，批號(hào)20190115、20190116、20190l17，每批樣品各3份，精密稱定，精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，DikmaDiamons訂C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：284nm柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算原花青素與維生素E（以α-生育酚計(jì)）含量。結(jié)果見(jiàn)表7。

三、結(jié)論
本文采用高效液相色譜法建立葡萄籽維生素E軟膠囊中原花青素和維生素E同時(shí)檢測(cè)的快速分析方法。將維生素E醋酸酯對(duì)照品溶液注入配備DAD檢測(cè)器的液相色譜儀，開(kāi)啟光譜采集，確定了維生素E醋酸酯的最大吸收波長(zhǎng)為284nm。原花青素分子中含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，在紫外光區(qū)也有很強(qiáng)的吸收，且在紫外區(qū)有唯一特征吸收峰，因此本方法確定液相色譜條件的檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。

本法確定采用超聲波提取法可提高提取效率，解決了國(guó)標(biāo)法測(cè)定維生素E時(shí)供試品溶液制備方法操作繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、重復(fù)性較差、需使用危險(xiǎn)化學(xué)品等問(wèn)題，同時(shí)解決了本需開(kāi)展兩相甲醇，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)284nm條件下進(jìn)行液相色譜分析可以有效快速的測(cè)得葡萄籽維生素E軟膠囊中原花青素和維生素E的含量。供試品溶液中原花青素和維生素E醋酸酯含量在12h內(nèi)保持穩(wěn)定。原花青素線性回歸方程為y=4576.4x+8.0492，線性相關(guān)系數(shù)為R²=0.9998，線性范圍為0.2806～2.8057mg/mL，平均回收率為99.4％。維生素E線性回歸方程為y=2086.4x-8.5767，線性相關(guān)系數(shù)為R²=1，線性范圍為0.1236～1.2358mg/mL，平均回收率為99.0％。且原花青素重復(fù)性與中間精密度試驗(yàn)RSD分別為0.9％、1.3％，維生素E重復(fù)性與中間精密度試驗(yàn)RSD分別為1.1％、0.8％。本方法重復(fù)性好，操作快速簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，可用于葡萄籽維生素E軟膠囊的質(zhì)量控制。

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