（4）單因素試驗

①離子液體種類對提取率的影響于100mL的兩口圓底燒瓶中加入1.00g磨碎的未洗陰干沙棘葉，固液比為1∶20（g·mL^-1），微波功率300W、微波時間6min、微波溫度60℃，考察溴化1-乙基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-丁基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-己基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-辛基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1癸基-3-甲基咪唑的60％乙醇溶；液、溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的60％乙。醇溶液對沙棘葉中總黃酮提取率的影響，選擇離子液體種類。

②微波時間對提取率的影響稱取1.00g未洗陰干沙棘葉粉末置于100mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為60％，離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度0.2mol·L^-1，料液比1∶20（g·mL^-1），分別在微波溫度60℃，微波功率300W的條件下提取2min、4min、6min、8min、10min，選擇最佳微波時間。

③微波功率對提取率的影響稱取1.0g陰干沙棘葉粉末置于100mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為60％，離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度0.2mol·L^-1，料液比1∶20（g·mL^-1），微波時間4min、微波溫度60℃，比較不同微波功率100W、200W、300W、400W、500W對沙棘葉中總黃酮提取率的影響。

④微波溫度對提取率的影響稱取1.00g未洗陰干沙棘葉粉末置于100mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為60％，離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度為0.2mol·L，料液比1∶20（g·mL^-1），微波功率400W、微波時間4min，比較不同微波溫度30℃、40℃、50℃、60℃、70℃對沙棘葉中總黃酮提取率的影響。

⑤料液比對提取率的影響稱取1.0g未洗陰干沙棘葉粉末置于100mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為60％，離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度為0.2mol·L^-1，微波功率400W、微波時間4min、微波溫度70℃，比較不同料液比1∶10（g·mL^-1）、1∶15（g·mL^-1）、1∶20（g·mL^-1）、1∶25（g·mL^-1）、1∶30（g·mL^-1）對沙棘葉中總黃酮提取率的影響。

⑥離子液體濃度對提取率的影響

稱取1．00g未洗陰干沙棘葉粉末置于100mL圓底燒瓶中，乙醇濃度為60％，微波功率400W、微波時間4min、微波溫度70℃，料液比1∶20（g·mL^-1），考察離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑濃度0.2mol·L^-1、0.6mol·L^-1、1.0mol·L^-1、1.4mol·L^-1、2.0mol·L^-1對沙棘葉總黃酮提取率的影響。

（5）正交優(yōu)化試驗確定最佳提取工藝

參考單因素實驗的結(jié)果設(shè)計L₁₈（5³）正交實驗表，以微波時間、功率、溫度，料液比，離子液體濃度為考察因素，探索沙棘葉總黃酮提取的最佳工藝。

（6）不同前處理方式對沙棘葉總黃酮的影響

于100mL圓底燒瓶中加入1.00g磨碎的未洗陰干沙棘葉，在不同條件下提取總黃酮，冷卻后減壓抽濾，濾餅用60％乙醇洗滌三次，所得濾液用60％乙醇定容到100mL容量瓶中。量取1mL提取液于25mL容量瓶中，然后加入顯色劑，用60％的乙醇定容至刻度。以0mL提取液為參比，測定其吸光度值。三次平行試驗后求平均值。在正交試驗優(yōu)化的提取條件下分別比較水洗陰干沙棘葉（6月份采摘）、未洗陰干沙棘葉（6月份采摘）、發(fā)酵陰干沙棘葉（6月份采摘）、炒干沙棘葉（6月份采摘）、蒸干沙棘葉（5月份采摘）、自然千曬沙棘葉（5月份采摘）、炒過沙棘葉（5月份采摘）對提取率的影響。

（7）沙棘葉總黃酮抗氧化活性試驗

分別量取質(zhì)量濃度為1.06mg·mL^-1的未洗陰干沙棘葉提取液10μL、20μL、30μL、40μL、50μL、60μL、70μL，置于4mL具塞試管中，再分別加入590μL、580μL、570μL、560μL、550μL、540μL、530μL的lmol·L^-1溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的乙醇溶液，最后與300μL、5.29X10-2mg·mL^-1的DPPH溶液混合，混合液搖勻后于避光環(huán)境下靜置30min。以O(shè)μL的提取液做為參比，在492nm的波長下用酶標(biāo)儀測定吸光度。DPPH自由基清除率=（A0一A樣）／A0×100％，由線性回歸方程得出其半數(shù)清除率IC50，即沙棘葉中總黃酮對DPPH自由基清除率達到50％時的有效濃度。

參考上述方法測定抗壞血酸溶液對DPPH自由基的清除率。比較沙棘葉總黃酮與抗壞血酸的半數(shù)清除率IC50，進而考察沙棘葉總黃酮的抗氧化活性。

二、結(jié)果討論

1、離子液體種類對沙棘葉中總黃酮提取率的影響由圖2可知，不同種類離子液體提取率大小順序為f＞e＞d＞a＞b＞C。離子液體烷基鏈越長，提取效果越好，一方面與離子液體對植物纖維素的溶解、溶脹有關(guān)，另一方面隨著離子液體烷基鏈的增長，其極性變小，有利于沙棘葉總黃酮的溶出，當(dāng)以溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑的乙醇溶液為提取劑時，整個提取劑的極性可能更接近黃酮的極性，沙棘葉總黃酮提取率最高。但離子液體烷基鏈超過12個碳后，發(fā)現(xiàn)離子液體自身水溶性變差，1mol·L^-1Br的60％乙醇溶液配成后有不溶懸浮物，就沒做進一步的提取探究。因此，后續(xù)均選定離子液體溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑進行試驗。

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