4討論

本文前期按照一定梯度濃度探索麝香通心滴丸最佳給藥劑量，分別以0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 g/kg的給藥劑量對(duì)SD大鼠進(jìn)行灌胃，并對(duì)各劑量組下的大鼠分別于給藥15、30、45、60、75、90、105、120 min后進(jìn)行眼眶取血并分析血樣。結(jié)果，大鼠在6.4、12.8 g/kg劑量下圖13節(jié)點(diǎn)數(shù)目前30的靶點(diǎn)各時(shí)間段含藥血清的離子流圖更豐富，并且基本一致，但12.8 g/kg較為濃稠，給灌胃帶來(lái)不便。最終，以6.4 g/kg為大鼠給藥劑量。

本研究參考文獻(xiàn)，分別采用甲醇和乙腈沉淀血清中的蛋白，發(fā)現(xiàn)甲醇沉淀處理得到的血中移行成分?jǐn)?shù)目較多，內(nèi)源性雜志干擾較少，因此提取溶劑選用甲醇。前期考察了15、30、45、60、75、90、105、120 min共8個(gè)采血點(diǎn)，對(duì)血清樣本質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同的入血成分會(huì)出現(xiàn)在不同采血時(shí)間點(diǎn)樣本中，然而在60 min后其入血成分的提取離子流響應(yīng)較低，因此選擇混合前4個(gè)取血點(diǎn)的血樣進(jìn)行分析。

大多數(shù)中藥口服給藥后，移行入血的成分才可能發(fā)揮藥效，通過(guò)分析口服給藥后血清中的入血成分來(lái)確定中藥于體內(nèi)直接作用物質(zhì)，已成為確定中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效途徑。本文基于HPLC-Q-TOF/MS對(duì)麝香通心滴丸進(jìn)行血清藥物化學(xué)研究，通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)鑒定出8個(gè)成分，文獻(xiàn)報(bào)道，沙蟾毒精、遠(yuǎn)華蟾毒精、脂蟾毒配基、蟾毒靈等均具有一定強(qiáng)心的作用。

Pharm Mapper是預(yù)測(cè)化合物生物活性，并建立相應(yīng)的公共網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器。本研究通過(guò)該服務(wù)器，采用反向藥效團(tuán)匹配方法得到虛擬篩選結(jié)果，并與GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中治療冠心病相關(guān)的靶點(diǎn)相結(jié)合，得到134個(gè)作用靶點(diǎn)，通過(guò)David數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其進(jìn)行KEGG通路分析，發(fā)現(xiàn)這8種入血成分有較多基因靶點(diǎn)有富集在與冠心病相關(guān)的通路上。通過(guò)Autodock Vina對(duì)上述入血成分與核心靶基因進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示入血成分與核心靶點(diǎn)結(jié)合性較好。

冠心病是冠狀動(dòng)脈發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化，導(dǎo)致血管腔狹窄甚至阻塞，造成心肌缺血、缺氧而導(dǎo)致的心臟病。細(xì)胞凋亡是冠心病病理過(guò)程的重要因素，抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax共同參與，ErbB signaling pathway通路與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中Bcl-2家族在內(nèi)源性凋亡過(guò)程中起重要調(diào)控作用。研究表明心肌細(xì)胞心肌缺血損傷后可通過(guò)活化ErbB signaling pathway通路，誘導(dǎo)內(nèi)源性Nrg-1下調(diào)促凋亡分子Bax表達(dá)，減輕細(xì)胞由于缺氧復(fù)氧而造成氧化應(yīng)激的損傷。Lin等通過(guò)Na2 S2O4誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞氧化應(yīng)激后，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的麝香通心滴丸后，結(jié)果表明麝香通心滴丸顯著提高了Na2 S2O4處理誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞的活力并抑制了其異常形態(tài)學(xué)變化麝香通心滴丸預(yù)處理可減輕Na2 S2O4引起的缺氧損傷，下調(diào)H9c2細(xì)胞凋亡前Bax的表達(dá)，并上調(diào)抗凋亡Bcl-2的表達(dá)。

麝香通心滴丸具有調(diào)節(jié)過(guò)PPAＲ信號(hào)通路的潛在作用。PPAＲ信號(hào)通路對(duì)冠心病的發(fā)展和糖代謝起著重要的調(diào)節(jié)作用。PPAＲ主要有PPAＲα、PPAＲβ和PPAＲγ三種表型。研究表明，PPAＲα和PPAＲγ的激活能通過(guò)抑制血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞增殖和遷移，抑制單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化成泡沫細(xì)胞，減少血管細(xì)胞黏附分子-1、ICAM1表達(dá)等多個(gè)方面，發(fā)揮治療冠心病的作用。PPAＲ-γ對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)主要是增加外周組織對(duì)胰島素的敏感性，從而改善胰島素抵抗。本研究發(fā)現(xiàn)PPAＲ信號(hào)通路上有麝香通心滴丸與冠心病的共同靶點(diǎn)PPAＲA、APOA2、PPAＲD、ＲXＲB、ＲXＲA、PPAＲG、FABP3、MMP1、FABP5、NＲ1H3，因此，推測(cè)麝香通心滴丸可能通過(guò)調(diào)節(jié)PPAＲ信號(hào)通路，改善胰島素抵抗來(lái)治療冠心病。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是調(diào)節(jié)生理或病理的血管新生及增加血管通透性的一個(gè)重要細(xì)胞因子，它與內(nèi)皮細(xì)胞上的受體結(jié)合后會(huì)提高微血管的通透性，導(dǎo)致大量的炎性細(xì)胞滲入肺間質(zhì)并產(chǎn)生膠原酶降解內(nèi)皮下基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增生遷移，從而形成新生血管。VEGFＲ2是VEGF的主要功能受體，其與VEGF相結(jié)合主要介導(dǎo)血管的生成，VEGF/VEGFＲ2信號(hào)通路是VEGF信號(hào)通路中的主要信號(hào)通路，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、分化，同時(shí)抑制其調(diào)亡。VEGF是血管生成過(guò)程中具有關(guān)鍵性的生長(zhǎng)因子，可以增加血管密度，促進(jìn)缺氧區(qū)甚至無(wú)血管區(qū)域內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)缺血組織內(nèi)的血管新生，是目前臨床上已知的最強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，可有效促進(jìn)心肌重塑，本研究發(fā)現(xiàn)VEGF signalingpathway通路上有麝香通心滴丸與冠心病的共同靶點(diǎn)PIK3CG、CDC42、MAPK1、MAP2K1、MAPK14、PLA2G2A、ＲAF1、SＲC、PIK3Ｒ1、KDＲ、AKT2，因此推測(cè)麝香通心滴丸可能通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF signaling pathway通路來(lái)治療冠心病。

綜上所述，本研究基于血清藥物化學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，在體內(nèi)化學(xué)成分分析辨識(shí)的基礎(chǔ)上通過(guò)關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析，初步闡釋了麝香通心滴丸治療冠心病作用機(jī)制，可為中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)分析及其相關(guān)作用機(jī)制探究提供一定依據(jù)。

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