植物飲料是一類（除果蔬汁、咖啡和茶外）以非果蔬類植物可食用的根、莖、葉、花、果及植物自身分泌的汁液等為原料經(jīng)加工或發(fā)酵制成的液體飲料。由于植物飲料的原料和提取物不同，功效方面或多或少都會(huì)對人體起到一些保健作用，占據(jù)著一定的市場份額。商家為節(jié)約成本和改善植物飲料的口感，在植物飲料中加入安賽蜜、甜蜜素、糖精鈉、阿斯巴甜等合成甜味劑和苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑。因此，建立快速、準(zhǔn)確測定植物（類）飲料中多種合成食品添加劑的方法顯得尤為重要。我國國家標(biāo)準(zhǔn) GB2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》對植物（類）飲料中合成甜味劑和防腐劑的最大使用量作出了明確規(guī)定，如安賽蜜為 0.3g/kg、甜蜜素為 0.65g/kg、苯甲酸為 1.0g/kg 和山梨酸為 0.5g/kg 等。目前已報(bào)道的食品中防腐劑和甜味劑的檢測方法主要有分光光度法、離子色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法、離子色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法等。其中，分光光度法因設(shè)備靈敏度受限，不適用于痕量分析；離子色譜法對樣品的要求比較高，適用于基質(zhì)較為干凈的液體樣品；氣相色譜法常需將化合物衍生化或進(jìn)行其他反應(yīng)后檢測，如甜蜜素，多組分同時(shí)分析有一定難度；高效液相色譜法同時(shí)測定多組分時(shí)選擇性較差，且存在樣品假陽性現(xiàn)象。色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用法由于其靈敏度高、選擇性好，對低濃度的目標(biāo)組分也能準(zhǔn)確定量測定，適用于多組分同時(shí)進(jìn)行分析。本試驗(yàn)采用超高效液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜儀，建立了對植物（類）飲料中 3 種防腐劑和 4 種合成甜味劑同時(shí)測定的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑

樣品：涼茶、冬瓜茶、菊花茶均購自本地零售超市和商店。

儀器：Triple Quad 6500+ 串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB Sciex 公司）；LC-30AD 超高效液相色譜儀（日本 Shimadzu 公司）；AL-204 萬分一電子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司）；UX620H 千分一電子天平（日本 Shimadzu 公司）；Milli-Q 超純水系統(tǒng)（美國 Millipore 公司）；BL22-600B 超聲波清洗機(jī)（上海比郎儀器有限公司）；Multi Reax全能型漩渦振蕩器（德國 Heidolph 公司）。試劑：甲醇、乙腈（色譜純，美國 Merck 公司）；甲酸（色譜純，德國 CNW 公司）；乙酸銨（色譜純，美國 ROE 公司）；山梨酸、苯甲酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00×103 mg/L，中國計(jì)量科學(xué)研究院）；安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00×103 mg/L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）；甜蜜素（99.1%，德 國 Dr. Ehrenstorfer GmbH 公 司 ）； 脫 氫 乙 酸（99.5%，美國 Chem Service 公司）；阿斯巴甜（99.0%，美國 Supelco 公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件
色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18 柱 （2.1mm×100mm，1.7μm）； 進(jìn) 樣 體 積：5μL；流速：0.25mL/min； 柱 溫：35 ℃； 流 動(dòng) 相：A-10mmol/L 乙酸銨，B- 乙腈，梯度洗脫條件如下表 1。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源，負(fù)離子模式（ESI-）；氣體溫度（TEM）：450℃ ；電噴霧電壓（IS）：-4500V；氣簾氣壓力（CUR）：35psi；碰撞氣壓力（CAD）：9psi；霧化氣壓力（GS1）：40psi；輔助氣壓力（GS2）：35psi；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；7 種目標(biāo)化合物的 MRM 參數(shù)見表 2。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取甜蜜素、阿斯巴甜和脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品 0.01g 于 3 個(gè) 10mL 容量瓶中，除脫氫乙酸用適量 25% 乙腈 - 水溶液（V/V）超聲輔助溶解并定容至刻度外，其他標(biāo)準(zhǔn)品用適量超純水溶解后并定容至刻度，配制成1.00×103mg/L 儲(chǔ)備液，于 4℃冰箱中保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液：分別取一定體積的上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和山梨酸、苯甲酸、糖精鈉和安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)原液于同一個(gè) 10mL 容量瓶中用超純水定容，混勻后制得含安賽蜜 2.50mg/L、苯甲酸 25.0mg/L、山梨酸 100mg/L、脫氫乙酸 100mg/L、糖精鈉10.0mg/L、甜蜜素 5.00mg/L 和阿斯巴甜 10.0mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于 4℃冰箱中保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液：分別移取適量體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用超純水配制成系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.4 樣品處理

準(zhǔn)確稱量混合均勻的植物飲料樣品 1g（精確至 0.001g）于 10mL 比色管中，用超純水稀釋定容至刻度，超聲輔助混勻，過 0.22μm 水相微孔濾膜后直接上機(jī)進(jìn)樣分析。

1.2.5 定量限和檢出限試驗(yàn)

將上述配制好的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液按優(yōu)化好的儀器條件上機(jī)進(jìn)行測定，以目標(biāo)組分色譜峰面積對相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸分析，得到各自的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。分別對各目標(biāo)化合物線性范圍的最低濃度點(diǎn)進(jìn)行信噪比分析，以 S/N=3 時(shí)對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度為方法檢出限，以 S/N=10 時(shí)對應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度為方法定量限，結(jié)果見表 3。

1.2.6 回收率和精密度試驗(yàn)

市面上植物（類）飲料品種繁多，比較有代表性的是涼茶、菊花茶和冬瓜茶，故選取這 3 種植物飲料進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)。在稱好的樣品中準(zhǔn)確加入一定量的 7 種食品添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成低、中、高 3 個(gè)不同添加水平，按上述實(shí)驗(yàn)方法處理，平行測定 6 次，扣除樣品本底值后計(jì)算結(jié)果見表 4。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)采用注射泵直接進(jìn)樣的方式將預(yù)先配制好的 0.200mg/L 各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液逐一注入串聯(lián)質(zhì)譜儀中，在 ESI 正離子和 ESI 負(fù)離子模式下分別進(jìn)行 Q1MS（Q1）全掃描，確定好電離方式后選擇響應(yīng)較高的準(zhǔn)分子離子作為母離子。結(jié)果顯示，大部分目標(biāo)化合物在 ESI 負(fù)離子監(jiān)測模式下的準(zhǔn)分子離子質(zhì)譜豐度響應(yīng)值高于正離子模式。在Product Ion（MS2）掃描中選取信號穩(wěn)定且豐度最強(qiáng)和次強(qiáng)的碎片離子分別作為定量 / 定性離子，然后在 MRM 監(jiān)測方式下建立離子對通道優(yōu)化各目標(biāo)化合物的最佳錐孔電壓和碰撞能量。苯甲酸和脫氫乙酸的定性離子響應(yīng)較低。優(yōu)化后所得的7 種添加劑質(zhì)譜參數(shù)見表 2，利用儀器的自動(dòng)優(yōu)化功能得到其他離子源參數(shù)見 1.2.2 質(zhì)譜條件。

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