蕎麥分為甜蕎和苦養(yǎng)，苦蕎又稱韃靼蕎麥，為一年生草本植物，高約30cm～60cm。它含有蛋白質(zhì)、維生素、不飽和脂肪酸等，有較高的營養(yǎng)價值和保健功能。養(yǎng)麥粉中蛋白質(zhì)所占比例約為10％～15％，含有豐富的賴氨酸、精氨酸等必需氨基酸，以彌補(bǔ)谷類和蔬菜類蛋白質(zhì)的緊缺。蕎麥中也含有其它谷物中沒有的蘆丁、槲皮素等黃酮類物質(zhì)，具有極高的藥用價值和較強(qiáng)的抗氧化性，可以預(yù)防多種慢性疾病，如各種毛細(xì)管脆性引起的出血病、高血壓和心腦血管疾病，也可以強(qiáng)化心血管，降低血脂和膽固醇含量。目前關(guān)于蛋白質(zhì)的提取方法主要有：堿溶酸沉、酶法提取、超聲輔助提取、微波輔助提取等方法。黃酮類化合物的提取方法有：堿溶酸沉、超聲輔助提取、酶法提取、微波輔助提取等方法，均提取了一種物質(zhì)，本實(shí)驗以堿溶液作為提取劑，對苦蕎中養(yǎng)麥蛋白和黃酮類化合物進(jìn)行超聲同步提取，克服了分步提取蕎麥蛋白和黃酮類物質(zhì)工藝的缺點(diǎn)，并利用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝，為苦蕎的進(jìn)一步開發(fā)提供技術(shù)支撐和理論依據(jù)。

一、材料與方法

1、原料與試劑

苦蕎麥：橫山縣陜北大地農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限責(zé)任公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、考馬斯亮藍(lán)G250（分析純）：源葉生物有限公司；亞硝酸鈉（分析純）：天津市福晨化學(xué)試劑廠；氫氧化鈉、無水乙醇、硝酸鋁、磷酸、石油醚（分析純）：天津市天力化學(xué)試劑有限公司；牛血清蛋白（生化試劑）：天津市化學(xué)試劑四廠；鹽酸（分析純）：洛陽昊華化學(xué)試劑有限公司。

2、儀器與設(shè)備

儀器與設(shè)備見表1所示。

3、試驗方法

（1）工藝流程

苦蕎麥→清洗→烘干→粉碎→脫脂→堿水溶解→超聲處理→離心→上清液→酸沉→沉淀→干燥→苦養(yǎng)蛋白和黃酮提取物

（2）苦蕎中蕎麥蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取條件優(yōu)化方法

①粉碎粒度對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取的影響

分別選取粉碎粒度為40目、60目、80目、100目，在液料比為30∶1mL/g，pH為9，超聲時間為40min，超聲溫度為65℃條件下進(jìn)行超聲同步提取，計算得率。

②液料比對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取的影響

分別選取液料比為10∶mL/g、20∶1mL/g、30∶1mL/g、40∶1mL/g、50∶1mL/g，在粉碎粒度為60目，pH為9，時間為40min，溫度為65℃條件下進(jìn)行超聲同步提取，計算得率。

③pH對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲輔助同步提取的影響

分別選取pH為7、8、9、10，在粉碎粒度為60目，液料比為30∶1mL/g，時間為40min，溫度為65℃條件下進(jìn)行超聲同步提取，計算得率。

④時間對苦蕎蛋白和黃酮類化合物超聲輔助同步提取的影響分

分別選擇超聲時間20min、30min、40min、50min、60min、70min，粉碎粒度為60目，液料比為30∶1mL/g，超聲溫度為65℃條件下進(jìn)行超聲同步提取，計算得率。

⑤溫度對苦養(yǎng)蛋白和黃酮類化合物超聲輔助同步提取的影響

選擇在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃、85℃六個溫度條件下，粉碎粒度為60目，液料比為30∶1mL/g，時間為40min進(jìn)行超聲同步提取，計算得率。

（3）總黃酮的測定。

（4）苦蕎提取液中養(yǎng)麥蛋白的測定。

二、結(jié)果與分析

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

（1）黃酮類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

得出蘆丁質(zhì)量濃度與吸光度之間的回歸方程為：A=12.585x一0.006，R2=0.9992，根據(jù)回歸方程計算總黃酮得率。

（2）苦養(yǎng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

得出牛血清蛋白質(zhì)量濃度與吸光度之間的回歸方程為：A=5.2957x+0.004，R2=0.9993，根據(jù)回歸方程計算蛋白得率。

2、苦蕎中蛋白和黃酮超聲同步提取條件的選擇

（1）單因素試驗結(jié)果

①粉碎粒度對苦養(yǎng)蛋白和黃酮類化合物超聲同步提取的影響隨著粉碎粒度的減小，苦蕎蛋白和黃酮得率隨之增大。當(dāng)粒度達(dá)到60目時，兩者得率均達(dá)到最大值，分別為8.06％和1.17％。粉碎粒度減小有助于物料與溶劑之間充分接觸，促進(jìn)溶解。當(dāng)粒度小于60目時，粉碎機(jī)與物料之間過度摩擦，產(chǎn)生的熱量會破壞營養(yǎng)物質(zhì)，使苦養(yǎng)蛋白和黃酮類物質(zhì)得率逐漸減小。所以選擇60目為超聲同步提取的最佳粉碎粒度。

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