糞大腸菌群是總大腸菌群中的一部分。 主要來自糞便遙在 44.5益溫度下能生長(zhǎng)并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群稱為糞大腸菌群。用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開， 使培養(yǎng)出來的菌主要為來自糞便中的大腸菌群， 從而更準(zhǔn)確地反映出水質(zhì)受糞便污染的情況 現(xiàn)階段袁糞大腸菌群檢測(cè)最常用的方法是多管發(fā)酵法和濾膜法。 但是這兩種方法測(cè)定的時(shí)間都很長(zhǎng)袁至少需要 48 h，步驟繁瑣需要驗(yàn)證試驗(yàn)，同時(shí)無菌操作對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件設(shè)施的要求 非常高。 而固定底物酶底物法分析 1 個(gè)樣品在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作的時(shí)間僅需要 1 min培養(yǎng)時(shí)間也縮短為 24 h在普通實(shí)驗(yàn)室內(nèi)就能進(jìn)行， 酶底物法能抑 制 200 萬個(gè)異樣細(xì)菌精確檢測(cè)到每 100 mL 樣品中的 1 個(gè)糞大腸菌群。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

主要儀器與試劑詳見表 1。

1.2 實(shí)驗(yàn)原理

在培養(yǎng)溫度為 44.5依1益條件下袁糞大腸菌群細(xì) 菌 能 特 異 性 產(chǎn) 生 茁 一 半 乳 糖 苷 酶，該生物酶可以分解色原底物釋放色 原體使培養(yǎng)液呈黃色袁 使培養(yǎng)液呈黃色變化的原 理來測(cè)定水中糞大腸菌群。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1 采用 100mL 無菌取樣瓶取 100mL 混勻水 樣 (如果水樣糞大腸菌群數(shù)大于2005 個(gè)/L則酌情少 取并用新配置的超純水稀釋至 100mL 刻度線)。 

2 在裝有水樣的取樣瓶中加入科立得 TM(Colilert余)試劑袁充分搖勻袁使試劑完全溶解。 

3 把溶解完全水樣倒入無菌培養(yǎng)定量盤(97孔)。

4 采用帶 97 孔定量盤橡膠托墊在封口機(jī)上 進(jìn)行封裝。

5 把封裝好的 97 孔定量盤放人 44.5+1oC 恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h。

6 培養(yǎng) 24h 后從培養(yǎng)箱中取出與 97 孔陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)比色盤進(jìn)行比較黃色孔顏色比 97 孔陽(yáng)性 標(biāo)準(zhǔn)比色盤深的表明為陽(yáng)性反應(yīng)根據(jù) 97 孔定量盤上的陽(yáng)性孔數(shù) 對(duì)照 IDEXX 公司提供的 MPN表報(bào)出結(jié)果。

1.3 樣品來源

水樣來源于慶陽(yáng)市蒲河地表水及巴家咀地表飲用水源水質(zhì)袁 按照 葉地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī) HJ/T91-2002的規(guī)定采集并于 0耀4益低溫避 光保存6h 內(nèi)進(jìn)行分析測(cè)試。

 2 結(jié)果與討論

2.1 試驗(yàn)結(jié)果
本次實(shí)驗(yàn)各取慶陽(yáng)市蒲河地表水和巴家咀飲 用水源水 30 份樣品分別用酶底物法和多管發(fā)酵 法進(jìn)行監(jiān)測(cè)對(duì)比分析袁結(jié)果見表 2。

2.2 數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用軟件 Excel2007, 對(duì) 2 種方法監(jiān)測(cè)的糞大腸菌群結(jié)果進(jìn)行配對(duì) t 檢驗(yàn)袁為了使 2 組數(shù)據(jù)呈正 態(tài)分布 現(xiàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)數(shù)處理后再進(jìn)行 t 檢驗(yàn)結(jié)果見表 3。

由表 3 可見泊松相關(guān)系數(shù)為 0.98堯0.994屬 強(qiáng)相關(guān)淵系數(shù)越趨于 1袁相關(guān)性直越好袁說明兩組 數(shù)據(jù)的相關(guān)性很好曰 P=0.426 和 0.725袁躍0.05袁說明 兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的顯著性差異可認(rèn)為多管發(fā)酵法與酶底物法實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有可比性與 相關(guān)文獻(xiàn)相符具有較好的一致性。

2.3 討論

1 酶底物法與多管發(fā)酵法分別測(cè)定以慶陽(yáng) 市境內(nèi)的蒲河為代表的水樣中的糞大腸菌群兩 者沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異遙 文中的分析結(jié)果與 相關(guān)參考文獻(xiàn)的結(jié)論有較好的一致性 。

2 酶底物法測(cè)定地表水中的糞大腸菌群袁操 作簡(jiǎn)便監(jiān)測(cè)的時(shí)效性優(yōu)于傳統(tǒng)的分析方法袁監(jiān)測(cè)周期短前期準(zhǔn)備工作少袁對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和人員要求 低袁能夠快速的監(jiān)測(cè)水質(zhì)微生物污染程序袁滿足環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)要求。

3 酶底物法在美國(guó)堯歐洲及部分亞洲國(guó)家被廣泛應(yīng)用于水中堯 糞大腸菌群及大腸埃希氏菌的檢測(cè)并通過美國(guó) EPA 認(rèn)證遙 中國(guó)也列入了葉生活 飲 用 水 標(biāo) 準(zhǔn) 檢 驗(yàn) 方 法 微 生 物 指 標(biāo) 曳 (GB 轅 T 5750援12要2006)袁可以測(cè)定生活飲用水中總大腸菌群和大腸埃希氏菌 廣東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局于 2013 年批準(zhǔn)發(fā)布了地方標(biāo)準(zhǔn)葉水中菌落總數(shù) 復(fù)合 酶底物檢測(cè)方法曳(DB44 轅 T 1163要2013)遙 酶底物法在國(guó)內(nèi)正逐步開始推廣 但是由于該方法的成本較高袁目前還沒有被廣泛使用 如果將來試劑堯耗 材價(jià)格能有所下降 水樣的測(cè)定范圍能進(jìn)一步提 高一定會(huì)得到更好的推廣。 

3 結(jié)論

固定底物酶底物法測(cè)定水樣中的糞大腸菌群具有較高的精密度和準(zhǔn)確性袁與多管發(fā)酵法進(jìn) 行比較在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上無顯著性差異 能滿足環(huán) 境監(jiān)測(cè)技術(shù)要求遙 該方法操作簡(jiǎn)便堯快捷袁工作效 率得到了明顯提高袁適合批量分析水質(zhì)類樣品建 議國(guó)家有關(guān)部門出臺(tái)水中糞大腸菌群酶底物分析方法。

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