槐枝為常用中藥，最早收載于《別錄》，《新修本草》中又名嫩槐枝，為豆科植物槐的嫩枝，具有散瘀止血，清熱燥濕，祛風(fēng)殺蟲之功效，主治崩漏、赤白帶下、痔瘡、陰囊濕癢、心痛、目赤、疥癬等，每年4～5月采收，曬干或鮮用。可煎湯、浸酒或燒灰內(nèi)服，亦可煎水熏洗、燒瀝涂。

槐枝含有較多的黃酮類化合物，臨床上常用于治療咽炎、中耳炎、膿皰瘡等，其中蘆丁為主要藥效成分。蘆丁又稱蕓香苷，是一種存在于多種植物中的黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗菌和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，因此用蘆丁含量作為測定槐枝的質(zhì)量控制指標(biāo)具有重要意義。

槐枝在歷版國家標(biāo)準(zhǔn)、《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》及《山東省中藥飲片炮制規(guī)范》中均未收載，在部分省級標(biāo)準(zhǔn)中有收載。但是檢驗(yàn)項(xiàng)目及內(nèi)容比較單一，有的地方標(biāo)準(zhǔn)中無檢驗(yàn)項(xiàng)目，有的地方標(biāo)準(zhǔn)中檢驗(yàn)項(xiàng)目有性狀、顯微鑒別、薄層鑒別及常規(guī)的藥材檢查項(xiàng)目。上述標(biāo)準(zhǔn)中均無含量測定方法，《遼寧省中藥材標(biāo)準(zhǔn)：第二冊》2019年版中薄層鑒別前處理方法復(fù)雜，展開劑用到易制毒試劑丁酮，因此優(yōu)化槐枝的薄層色譜鑒別方法及建立高效液相色譜法測定蘆丁含量具有重要意義。
目前文獻(xiàn)中對槐枝的質(zhì)量評價(jià)多采用其高麗槐素、蘆丁、槲皮素以及揮發(fā)油的含量作為評價(jià)指標(biāo)。但成麗等采用高效液相色譜法測定槐枝中高麗槐素含量，方法重現(xiàn)性好，但是因?yàn)楦啕惢彼貙φ掌分苽浞爆崳焕趶V泛普及。陳華國等采用高效液相色譜法同時(shí)測定槐枝中蘆丁和槲皮素含量，以甲醇–0.01mol/L乙酸銨(體積比為47∶53)混合溶液為流動(dòng)相，流動(dòng)相中需要加入鹽溶液，配制比較復(fù)雜，操作不當(dāng)容易阻塞色譜柱，損壞高效液相色譜儀。熊維政等利用高效液相色譜法測定國槐槐枝及槐葉中蘆丁含量，并進(jìn)行了比較，采用的流動(dòng)相配制簡便，但是樣品提取過程中沒有考察溶劑的影響，不能精準(zhǔn)地測定槐枝中蘆丁含量。趙超等以蘆丁為對照品，利用分光光度法測定槐枝中總黃酮類含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品處理過程繁瑣，操作復(fù)雜。張艷焱等采用水蒸汽蒸餾法分別提取新鮮和干燥槐枝中的揮發(fā)油，用氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法分析和鑒定其化學(xué)成分，方法對儀器及操作者水平要求較高，不適用于槐枝的日常檢驗(yàn)。

筆者收集了10批槐枝飲片樣品，以蘆丁含量為評價(jià)指標(biāo)，對樣品提取條件、薄層色譜展開劑、色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了槐枝的薄層色譜鑒別法及高效液相色譜法測定其中蘆丁含量的方法。該方法操作簡單、分離度好、經(jīng)濟(jì)環(huán)保，準(zhǔn)確度高，為槐枝質(zhì)量控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了研究基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC–20AT型，LCsolution工作站，島津企業(yè)管理（中國）有限公司公司。數(shù)控超聲波清洗器：KQ–600GDV型，昆山市超聲儀器有限公司。高速萬能粉碎機(jī)：FW100型，天津市泰斯特儀有限公司。電子天平：MS204TS型，感量為0.01mg，瑞士梅特勒–托利多儀器公司。蘆丁對照品：批號為100080–201811，含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為91.7%，中國食品藥品檢定研究院。硅膠G薄層板，青島海洋化工廠分廠。甲醇：色譜純，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰尽１姿幔荷V純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司?；敝︼嬈瑯悠罚?0批，編號分別為1～10，均為豆科植物槐SophorajaponicaL.的嫩枝，經(jīng)干燥，切片制得，產(chǎn)地均為山東。其余試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為純凈水。

1.2 薄層色譜鑒別

1.2.1 對照品溶液制備

取蘆丁對照品適量，加入甲醇溶解，配制成蘆丁的質(zhì)量濃度為2mg/mL的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液制備

稱取2g槐枝粉末（過二號篩，篩孔直徑為2000μm），加入30mL石油醚（30～60℃）超聲處理（500W，頻率40kHz）20min，過濾，棄去濾液，濾渣揮干溶劑后，加入50mL甲醇超聲處理（500W，頻率40kHz）30min，過濾，取濾液蒸干，殘?jiān)尤?mL甲醇溶解，所得溶液即為供試品溶液。

1.3 高效液相色譜法測定

1.3.1 色譜條件

色譜柱：KromasilC₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm，瑞典諾力昂公司）；流動(dòng)相：甲醇–1%冰醋酸溶液（體積比為32∶68）；檢測波長：257nm；流量：1.0mL/min；柱溫：36℃；進(jìn)樣體積：10μL。

1.3.2 對照品溶液制備

精密稱取蘆丁對照品0.10282g，置于50mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標(biāo)線，搖勻，過濾，取續(xù)濾液2mL，置于250mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標(biāo)線，搖勻，配制成蘆丁的質(zhì)量濃度為15.1μg/mL的對照品溶液。

1.3.3 供試品溶液制備

精密稱取槐枝粉末（過二號篩）約0.5g，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50mL，密塞，稱量并記錄質(zhì)量，超聲處理（500W，頻率40kHz）30min，冷卻，再次稱量質(zhì)量，用50%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，續(xù)濾液即為供試品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 薄層色譜鑒別條件選擇

按照《中國藥典》2020年版槐米的薄層鑒別方法，選擇1號槐枝樣品粉末（過二號篩）2g，加入50mL甲醇超聲處理（500W，頻率40kHz）30min，過濾，取濾液蒸干，殘?jiān)尤?mL甲醇溶解，作為供試品溶液。按1.2.1方法制備對照品溶液。按照薄層色譜法（2020年版《中國藥典：四部》　通則　0502）試驗(yàn)方法，分別吸取供試品溶液和對照品溶液各2μL和5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯–甲醇–水（體積比為8∶1∶1）溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，待乙醇揮干后，置于紫外光燈（365nm）下檢視，結(jié)果如圖1所示。由圖1可以看出，供試品色譜圖中，沿著展開過程，有明顯的未完全分離的熒光斑條，在與對照品色譜圖相應(yīng)的位置上，有相應(yīng)的未分離完全的熒光斑點(diǎn)，點(diǎn)樣量2μL及5μL無明顯區(qū)別，結(jié)果表明，供試品色譜圖中，雖然含有蘆丁，但是因?yàn)闃悠冯s質(zhì)較多，提取條件或展開劑選擇不恰當(dāng)，導(dǎo)致斑點(diǎn)未完全分離。

考慮到槐枝樣品中含有色素等極性較大的物質(zhì)較多，先對樣品進(jìn)行脫色處理。稱取3份槐枝粉末（過二號篩）樣品，各2g，分別加入石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、乙醚各30mL，分別超聲處理20min；再稱取3份槐枝粉末（過二號篩）樣品，各2g，分別加入石油醚（30～60℃）、石油醚（60～90℃）、乙醚各30mL，分別回流提取20min，將處理后的6份樣品分別過濾，棄去濾液，濾渣揮干溶劑后，加入50mL甲醇超聲處理（500W，頻率40kHz）30min，過濾，取濾液蒸干，加入2mL甲醇使殘?jiān)芙?，制?份供試品溶液。以乙酸乙酯–甲醇–水（體積比為8∶1∶1）溶液為展開劑，考察不同提取溶劑及提取方法的展開效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以石油醚（30～60℃）、超聲處理20min展開結(jié)果最好，供試品色譜圖在與對照品色譜圖相應(yīng)位置上，能顯示出相同顏色的斑點(diǎn)，但是斑點(diǎn)有拖尾。在展開劑中加入少量甲酸，斑點(diǎn)分離效果好，無拖尾現(xiàn)象，故樣品提取方法選擇先加入石油醚（30～60℃），超聲處理20min，然后加入50mL甲醇提取，展開劑選擇乙酸乙酯–甲醇–甲酸–水（體積比為8∶1∶1∶1）溶液。

相關(guān)鏈接：乙醚，乙酸乙酯，石油醚，蘆丁

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