2.2 單因素優(yōu)化BPO檢測(cè)體系

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)檢測(cè)體系的影響

2.2.1.1 最佳波長(zhǎng)的確定

選擇不同濃度的BPO標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在波長(zhǎng)480、490、500、510、520、530和540nm下采用1cm的比色皿測(cè)定其吸光度，如圖2。

根據(jù)吸光度的大小確定最適檢測(cè)波長(zhǎng)，其中吸光度越大說(shuō)明檢測(cè)體系在相應(yīng)波長(zhǎng)下響應(yīng)性能最好，由圖2所示，該體系在510nm處BPO的吸光度最高，說(shuō)明在檢測(cè)波長(zhǎng)為510nm條件下，檢測(cè)體系的靈敏度最高，響應(yīng)性能最好，故篩選最適檢測(cè)波長(zhǎng)為510nm。

2.2.1.2 方差分析

將在各個(gè)波長(zhǎng)下所測(cè)的吸光度的數(shù)值進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果見(jiàn)表1。如表1所示，P=0.0001，P＜0.01，所以檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)BPO檢測(cè)體系具有非常顯著的影響。

2.2.2 緩沖液pH對(duì)檢測(cè)體系的影響

2.2.2.1 最佳pH的確定

由于BPO只能在酸性條件氧化Fe²⁺為Fe³⁺，發(fā)生褪色反應(yīng)，因此設(shè)定pH范圍在3～6之間。在優(yōu)化后得到的最適波長(zhǎng)條件下，分別設(shè)定緩沖液pH為3.5、3.8、4.1、4.4、5.1、5.4和6.0時(shí)采用1cm的比色皿測(cè)定BPO標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，根據(jù)吸光度的大小確定最適緩沖液pH，其中吸光度最大處對(duì)應(yīng)緩沖液的最佳pH條件，如圖3。

由圖3所示，初期吸光度隨著緩沖液pH的升高而逐漸變大，在體系緩沖液的pH為4.4時(shí)，吸光度數(shù)值達(dá)到最高，為0.616。當(dāng)緩沖液的pH繼續(xù)升高時(shí)，體系的吸光度值又開(kāi)始出現(xiàn)下降趨勢(shì)。鑒于本反應(yīng)為褪色反應(yīng)，因此選擇吸光度較低的數(shù)值為最優(yōu)水平，故篩選最適緩沖液pH為6。

2.2.2.2 方差分析

將在不同緩沖液pH條件下所測(cè)的吸光度的數(shù)值進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果見(jiàn)2，P=0.0001，P＜0.01，由此得出，緩沖液pH對(duì)BPO檢測(cè)體系的影響非常顯著。

2.2.3 反應(yīng)溫度對(duì)檢測(cè)體系的影響

2.2.3.1 最佳反應(yīng)溫度的確定

設(shè)定反應(yīng)溫度為室溫（約23℃）、30、40、50和60℃，采用1cm的比色皿測(cè)定BPO標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，根據(jù)吸光度的大小確定最適反應(yīng)溫度，如圖4。

由圖4可知，在反應(yīng)初期其吸光度出現(xiàn)最大值，隨著反應(yīng)溫度的升高，吸光度開(kāi)始下降，當(dāng)溫度為50℃時(shí)，吸光度降至最低點(diǎn)。但伴隨溫度的提升，吸光度又開(kāi)始上升，在溫度超過(guò)60℃時(shí)，吸光度又出現(xiàn)下降趨勢(shì)，這種反復(fù)的現(xiàn)象說(shuō)明，在當(dāng)反應(yīng)溫度超過(guò)為50℃時(shí)，檢測(cè)體系對(duì)溫度的響應(yīng)已經(jīng)出現(xiàn)了不穩(wěn)定的情況，鑒于此篩選最適反應(yīng)溫度為50℃。

2.2.3.2 方差分析

將在各個(gè)波長(zhǎng)下所測(cè)的吸光度的數(shù)值進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，P=0.0001，P＜0.01，所以反應(yīng)溫度對(duì)BPO檢測(cè)體系的影響非常顯著。

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