2.1.2.3 糖蛋白SEG-2對(duì)LPS誘導(dǎo)得RAW264.7細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響

糖蛋白SEG-2對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥因子表達(dá)如圖4所示。

由圖4可知，小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7經(jīng)過1μg/mL的LPS催化刺激后，較空白組而言，4種炎癥因子iNOS、COX-2、TNF-α及IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)水平都有顯著上升（P＜0.05），分別升至0.918，0.965，1.084和0.927。低劑量的SEG-2對(duì)炎癥因子COX-2、TNF-α的mRNA相對(duì)表達(dá)水平下降效果顯著（P＜0.05），對(duì)炎癥因子iNOS和IL1β的mRNA表達(dá)下調(diào)效果極顯著（P＜0.01），中、高劑量的SEG-2對(duì)TNF-α、COX-2的mRNA下調(diào)效果顯著（P＜0.05），對(duì)炎癥因子iNOS和IL-1的mRNA表達(dá)下調(diào)效果極顯著（P＜0.01），相對(duì)表達(dá)水平最低降至0.148，0.387，0.566和0.237。

2.2 GBRG的降血糖作用研究結(jié)果分析

2.2.1 各組分GBRG對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性的結(jié)果分析

各組分GBRG對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的測定結(jié)果如圖5所示。

由圖5可知，3種GBRG組分均具有一定的α-葡萄糖苷酶的抑制效果。水洗糖蛋白WEG對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果最弱，抑制率為36.67%；鹽洗糖蛋白SEG-1對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果強(qiáng)于WEG，抑制率為52.27%；SEG-2對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制效果最強(qiáng)，抑制率高達(dá)65.71%。表明SEG-2組分中的酶抑制物質(zhì)的含量最高。

2.2.2 SEG-2的α-葡萄糖苷酶抑制率及半數(shù)抑制濃度的測定結(jié)果分析

SEG-2對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用的結(jié)果如圖6所示。

由圖6可知，質(zhì)量濃度在0～0.6mg/mL的范圍內(nèi)，SEG-2抑制α-葡萄糖苷酶的能力隨SEG-2濃度的增加而提高。其濃度與抑制率呈線性相關(guān)關(guān)系，回歸方程為Y=58.97X+23.064，R=0.9905，求其IC50是0.46mg/mL。在0.6～1.0mg/mL范圍內(nèi)，隨著SEG-2濃度的增大，α-葡萄糖苷酶抑制率較平緩，在0.6mg/mL時(shí)，SEG-2對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率與對(duì)照組最為接近。因此，糖蛋白SEG-2在整體上具有良好的酶抑制活性，并且在0.6mg/mL的質(zhì)量濃度下抑制效果最佳。

2.2.3 各組分GBRG對(duì)α-淀粉酶抑制活性的結(jié)果分析

各組分GBRG對(duì)α-淀粉酶抑制率的測定結(jié)果如圖7所示。

由圖7可知，3種GBRG組分均對(duì)α-淀粉酶有較強(qiáng)的抑制效果。水洗糖蛋白WEG抑制α-淀粉酶的能力最弱，抑制率為52.5%；鹽洗糖蛋白SEG-1抑制α-淀粉酶的能力弱于SEG-2，抑制率為58.5%；而SEG-2抑制α-淀粉酶的能力最強(qiáng)，抑制率可達(dá)64.5%。盡管3種糖蛋白對(duì)α-淀粉酶有所抑制，但總體上稍弱于阿卡波糖。

2.2.4 SEG-2的α-淀粉酶抑制率及半數(shù)抑制濃度的測定結(jié)果分析

SEG-2對(duì)α-淀粉酶的抑制作用的結(jié)果如圖8所示。

如圖8所示，在質(zhì)量濃度處于0～1mg/mL范圍內(nèi)，SEG-2的α-淀粉酶抑制率與糖蛋白濃度成正比例關(guān)系。當(dāng)質(zhì)量濃度為1mg/mL時(shí)，SEG-2的抑制率可達(dá)到54.26%。一定范圍內(nèi)，抑制率與SEG-2濃度呈線性相關(guān)，其回歸方程為Y=39.074X+14.36，R=0.9962，求得IC50為0.912mg/mL。SEG-2與阿卡波糖的抑制能力均隨濃度的增加而不斷提高，表明糖蛋白SEG-2具有較好的α淀粉酶抑制能力，但弱于阿卡波糖。

3 結(jié)論

天然植物糖蛋白不僅具有廣泛的抗腫瘤和抗氧化能力，還能增強(qiáng)人體免疫力，抑制細(xì)菌生長，調(diào)節(jié)機(jī)體大部分的生命活動(dòng)。大多數(shù)蛋白質(zhì)是糖蛋白。本試驗(yàn)以GBRG為原料，研究其抗炎、降血糖作用。Li等發(fā)現(xiàn)蓮子糖蛋白可以有效抑制炎癥因子NO的產(chǎn)生，抑制經(jīng)LPS刺激后的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。夏炎等發(fā)現(xiàn)，蒲公英糖蛋白可以通過調(diào)控NF-κB信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，顯著抑制TNF-α和IL-6的分泌及TNFα、IL-6和iNOSmRNA的表達(dá)以及NO的合成，從而發(fā)揮其抗炎作用。喬春雷從淫羊藿中提取的糖蛋白可抑制與血糖代謝相關(guān)酶的活性，并對(duì)α-葡萄糖苷酶、α-淀粉的抑制作用呈劑量依賴性；劉主等從甘薯中提取的糖蛋白可對(duì)經(jīng)四氧嘧啶誘導(dǎo)后的糖尿病患病小鼠有較強(qiáng)的降血糖作用。

本文通過試驗(yàn)手段，分離純化所提取的GBRG，獲取不同的3種糖蛋白組分WEG、SEG-1和SEG-2。對(duì)這3種糖蛋白進(jìn)行經(jīng)LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7抗炎癥試驗(yàn)和α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶的抑制能力測定，篩選出具有良好降血糖作用和抗炎癥能力的糙米糖蛋白WEG-2，為補(bǔ)充或代替化學(xué)藥物的深度開發(fā)提供參考，同時(shí)對(duì)促進(jìn)我國農(nóng)業(yè)和稻谷的可持續(xù)發(fā)展具有重大意義。但對(duì)GBRG的深入研究還有很長的科研之路要走，依舊要利用更高端的設(shè)備與科技來開展全方面的探析，便于更全面地發(fā)揮出GBRG的有益作用。

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