在不可控出血中，創(chuàng)傷出血和外科手術(shù)失血是日常意外事故中經(jīng)常發(fā)生的事故，出血失控也是導(dǎo)致傷員死亡的重要因素。為了避免大量失血，因此開(kāi)發(fā)出有效、快速并且安全的止血?jiǎng)┰谑鹿尸F(xiàn)場(chǎng)以及院前及時(shí)有效的止血意義重大。近年來(lái)，隨著生物醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、生物工程的快速發(fā)展，生物止血材料在促進(jìn)傷口愈合方面顯示出巨大潛力。各種類(lèi)型的止血粉也不斷被開(kāi)發(fā)出來(lái)，其類(lèi)型逐漸由動(dòng)物源向植物源轉(zhuǎn)化，不可吸收向可吸收轉(zhuǎn)化。其中，微孔多聚糖止血粉是一種自主研發(fā)的新型高分子材料，主要是由馬鈴薯植物淀粉經(jīng)過(guò)變性處理后所制成的微孔多聚糖淀粉顆粒，可通過(guò)立即吸收血液中的液體成分以及濃縮血小板和凝血因子來(lái)實(shí)現(xiàn)，具有良好吸附凝血成分的效果，起到加速內(nèi)源性凝血過(guò)程，從而達(dá)到快速的術(shù)中止血目的。其作為一種來(lái)源于植物淀粉的材料，理論上來(lái)說(shuō)是非常安全的，并且在人體傷口處施用后，最終會(huì)被組織以及體液中相應(yīng)的酶分解，形成單糖等機(jī)體正常所需成分，最終被機(jī)體所代謝出體外。生物相容性和高效止血材料的開(kāi)發(fā)可以被視為術(shù)中和術(shù)后快速止血的最佳方法。2004年，Murat等首次描述了植物性淀粉來(lái)源的止血?jiǎng)Ｄ壳?，可吸收止血?jiǎng)┮呀?jīng)成為外科醫(yī)療設(shè)備的重要組成部分，用于處理術(shù)中出血。鑒于這些止血?jiǎng)┠軌蛴行M足外科手術(shù)過(guò)程的基本需求，新的止血?jiǎng)┎粩嚅_(kāi)發(fā)，其安全性也是最為關(guān)注的。

止血粉的商業(yè)信息表明，它們?cè)谕饪剖中g(shù)中被用作控制毛細(xì)血管、靜脈和小動(dòng)脈出血的輔助止血?jiǎng)３晒Φ闹寡獙?duì)于最大限度地減少與一般外科手術(shù)有關(guān)的圍手術(shù)期發(fā)病率和死亡率至關(guān)重要。在外科手術(shù)過(guò)程中，當(dāng)無(wú)法通過(guò)常規(guī)方法控制出血時(shí)，通常使用外科止血?jiǎng)┳鳛檩o助手段，該方法可以實(shí)現(xiàn)快速止血的安全性和有效性，易于使用且能夠在大傷口中形成持久止血并且對(duì)血源性疾病沒(méi)有任何風(fēng)險(xiǎn)。Giday等研究證實(shí)了止血粉末可以在動(dòng)物動(dòng)脈出血中的實(shí)現(xiàn)初始止血，而且沒(méi)有腸梗阻或意外的管腔效應(yīng)，沒(méi)有局部或局部顆粒效應(yīng)，沒(méi)有全身栓塞效應(yīng)，也沒(méi)有全身凝血作用。在臨床上，這種多聚糖止血粉在內(nèi)窺鏡鼻竇手術(shù)、皮膚外科手術(shù)和腹腔鏡手術(shù)中表現(xiàn)了出色的效果。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)同類(lèi)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)品面市。因此，本文重點(diǎn)探討微孔多聚糖止血粉的主要成分以及止血粉生物降解的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，以期為臨床使用止血粉提供代謝依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

微孔多聚糖止血粉。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備

止血粉樣品在烘箱中50℃烘至恒重后，稱(chēng)量3份，每份稱(chēng)取約5.0mg，分別溶于1mol/L三氟乙酸（TFA）溶液，配成濃度5mg/mL。100℃下降解12h，分別取200μL降解液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除酸解樣品中的TFA，用稀氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，加水定容于20mL容量瓶，配成上樣濃度50×10^-6，0.22µm濾膜過(guò)濾備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

配制100×10^-6的葡萄糖和麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液及其混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；配制7個(gè)濃度梯度葡萄糖和麥芽糖二者的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，葡萄糖濃度分別為0.1×10^-6、0.5×10^-6、1×10^-6、2×10^-6、4×10^-6、8×10^-6和10×10^-6，麥芽糖濃度分別為1×10^-6、5×10^-6、10×10^-6、20×10^-6、40×10^-6、80×10^-6、100×10^-6；進(jìn)樣量為20μL；采集時(shí)間為40min。

1.2.3 止血粉標(biāo)準(zhǔn)曲線

將止血粉配成母液濃度為1mg/mL，沸水溶解，冷卻至室溫，再將母液倍比稀釋成0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL和0.03125mg/mL的溶液，分別取200μL加入至96孔板，然后再分別加入0.1mol/L碘溶液10μL，充分混勻后立即采用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀在610nm處測(cè)其吸收度（A值），繪制淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 止血粉體外酶解

稱(chēng)取定量止血粉于烘箱中50℃烘至恒重。配制20mmol/LNaH₂PO₄和6.7mmol/LNaCl溶液，用1mol/LNaOH/HCl調(diào)節(jié)pH為6.9，稱(chēng)量止血粉110.8mg，用上述緩沖液配成止血粉濃度為1mg/mL。加入30.7mgCaCl₂（～2.5mmol/L），于沸水中溶解5min，冷卻至室溫。分別取出3份各3mL溶液，作為酶降解0h的樣品。剩余溶液中加入3mgα-淀粉酶粉末，混勻。把上述已加α-淀粉酶溶液分裝于三個(gè)相同的50mLEP管中（3個(gè)平行樣），每管33mL。放入37℃恒溫水浴鍋中進(jìn)行降解，分別作用1h、2h、3h、5h、8h、12h、24h、36h、48h后，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取3mL樣品，100℃煮沸除酶活性。其中1mL樣品于12000r/min離心15min，取上清液，超純水稀釋10倍至止血粉濃度為100×10-6用于離子色譜分析；其余2mL樣品滅酶活后不離心直接用于止血粉淀粉含量測(cè)定，每個(gè)樣品分別取3份200μL轉(zhuǎn)移至96孔板，然后分別加入0.1mol/L碘溶液10μL，充分混勻后立即采用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀在610nm處測(cè)其吸收度（A值）。

2 結(jié)果

2.1 果糖和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品離子色譜圖的確定

如圖1所示，酸降解止血粉的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合離子色譜分離條件下，果糖和葡萄糖的保留時(shí)間分別為14.9min和10.5min；葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=34.416x-8.551，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997。

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