2 結(jié)果與分析

2.1 LPX3和LPG2的純化

從新鮮和十制龍眼果肉中分離純化得到LPX3和LPG2兩種多糖。LPX3和LPG2的串聯(lián)凝膠柱色譜圖如圖1所示。結(jié)果顯示，LPX3和LPG2均呈現(xiàn)單一對(duì)稱(chēng)的色譜峰且相對(duì)分子質(zhì)量分布較窄，出峰時(shí)間分別為19.45min和26.50min，表明LPX3和LPG2具有較好的均一性。

2.2 LPX3和LPG2對(duì)腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞增殖的影響

南圖2可知，與空白對(duì)照組相比，隨著LPX3和LPG2質(zhì)量濃度的增加(6.25～200μg/mL)，腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為200μg/mL時(shí)，腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)分別為235.45％和227.60％，兩者問(wèn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。表明LPX3和LPG2均對(duì)小力更強(qiáng)。鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞無(wú)毒性作用，且能促進(jìn)其增殖。

2.3 LPX3和LPG2對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響

由圖3可知，與空白對(duì)照組相比，隨著LPXLPG2質(zhì)量濃度的增加(100～400μg/mL)，巨噬細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。當(dāng)質(zhì)量濃度為100μg/mL和200μg/mL時(shí)，LPX3和LPG2之問(wèn)對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的促進(jìn)能力無(wú)顯著差異(P＞0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為400μg/mL時(shí)，巨噬細(xì)胞增殖分?jǐn)?shù)分別為135.90％和143.70％，兩者間存在顯著差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，新鮮和十制龍眼多糖均對(duì)巨噬細(xì)胞無(wú)毒性作用，且具有促進(jìn)其增殖的作用；在400μg/mL時(shí)，LPG2促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖的能力更強(qiáng)。

2.4 LPX3和LPG2對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

如圖4所示，與空白對(duì)照組相比，LPX3和LPG2隨著質(zhì)量濃度的增加(50～400μg/mL)，巨噬細(xì)胞的吞噬分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。在LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為400μg/mL時(shí)，吞噬分?jǐn)?shù)分別為192.03％和198.28％，兩者問(wèn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能有效促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬抗原。巨噬細(xì)胞的活化在機(jī)體免疫應(yīng)答過(guò)程中扮演著重要角色，吞噬能力的增強(qiáng)是其活化的標(biāo)志之一。巨噬細(xì)胞通過(guò)吞噬清除受損細(xì)胞或外來(lái)抗原，誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-1B、TNF-α等細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機(jī)體免疫阻。有報(bào)道顯示龍眼多糖組分和硫酸化修飾的龍眼多糖組分能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力。

2.5 LPX3和LPG2對(duì)巨噬細(xì)胞分泌NO的影響

NO作為一種重要的細(xì)胞信號(hào)分子，廣泛參與細(xì)胞和機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。如圖5所示，與空白對(duì)照組相比，NO分泌量隨著LPX3質(zhì)量濃度的增加而顯著增加(P＜0.05)。LPG2在25～200μg/mL范同內(nèi)，能顯著促進(jìn)NO分泌(P＜0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2的質(zhì)量濃度均為200μg/mL時(shí)，NO分泌量分別為空白對(duì)照組的5.4倍和5.6倍，兩者問(wèn)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，25～200μg/mL的LPX3和LPG2引起了細(xì)胞促炎信號(hào)分子NO分泌量的顯著改變，可能誘導(dǎo)了巨噬細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的激活。同時(shí)，研究顯示炎癥因子的過(guò)度釋放會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體的炎癥因子風(fēng)暴，對(duì)機(jī)體造成損傷，LPX3和LPG2促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌NO的活性有待進(jìn)一步研究。

2.6 LPX3和LPG2對(duì)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

如圖6所示，與空白對(duì)照組相比，LPX3和LPG2(25～400μg/mL)可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α，并呈現(xiàn)出一定劑量關(guān)系。當(dāng)質(zhì)量濃度為400μg/mL時(shí)，TNF-α的分泌量分別為空白對(duì)照組的17.67倍(296.20pg/mL)和H31.54倍(528.65μg/mL)，兩者具有顯著性差異(P＜0.05)：IL-6的分泌量分別為空白對(duì)照組的18.42倍(73.69pg/mL)和27.31倍(109.22pg/mL)，兩者具有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6。當(dāng)質(zhì)量濃度為400μg/mL時(shí)，LPG2促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α的能力更強(qiáng)。IL-6和TNF-α在宿主防御病原體和急性應(yīng)激中起著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞IL-6和TNF-α分泌量的增加可能與細(xì)胞的激活和防御有一定關(guān)系。

3 結(jié)語(yǔ)

作者采用小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞模型，比較了LPX3和LPG2誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌的活性。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能促進(jìn)小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞增殖和激活巨噬細(xì)胞，且具有劑量依賴(lài)性的促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬和誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α。同時(shí)，與LPX3相比，LPG2表現(xiàn)出更強(qiáng)的激活巨噬細(xì)胞的活性。

多糖的生物活性與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，新鮮和干制龍眼果肉多糖的分子結(jié)構(gòu)差異及其激活巨噬細(xì)胞的分子機(jī)制差異還有待進(jìn)一步研究。

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