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致瀉大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法(三)

發(fā)布時(shí)間:2020-11-10 16:30 編輯者:偉業(yè)計(jì)量

(八)尿素瓊脂

蛋白胨1g,氯化鈉5g,葡萄糖1g,磷酸二氫鉀2g,0.4%酚紅溶液3mL,瓊脂20g,蒸餾水1000mL,20%尿素溶液100mL,pH7.2±0.1。

將除尿素和瓊脂以外的成分配好,并校正pH,加入瓊脂,加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷卻至50~550C,加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%,最終pH為7.2±0.1。分裝于滅菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36-1℃培養(yǎng)24h,觀(guān)察結(jié)果。

尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

(九)緩沖葡萄糖蛋白胨水(V—P試驗(yàn)用)

V-P試劑

磷酸氫二鉀5g,多胨7g,葡萄糖5g,蒸餾水1000mL,pH7.0。

溶化后校正pH,分裝試管,每管1 mL,1210C高壓滅菌15min。

V—P試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2~4d。加入6%a-萘酚-酒精溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液O.2mL,充分振搖試管,觀(guān)察結(jié)果。陽(yáng)性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±l℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀(guān)察。

(十)氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基

蛋白胨10g,氯化鈉5g,磷酸二氫鉀0.225g,磷酸氫二鈉5.64g,蒸餾水1000mL,O.5%氰化鉀溶液20mL,pH7.6。

將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,1210C高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.OmL(最后濃度為l:10000),分裝于12mm×100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在40C冰箱內(nèi),至少可保存2個(gè)月。同時(shí),將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用。

試驗(yàn)方法:將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液,挑取一環(huán)接種于氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基。并另挑取一環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基。36±10C培養(yǎng)1~2d,觀(guān)察結(jié)果。如有細(xì)菌生長(zhǎng)即為陽(yáng)性(不抑制),經(jīng)2d細(xì)菌不生長(zhǎng)為陰性(抑制)。

氰化鉀是劇毒藥物,使用時(shí)應(yīng)小心,切勿沾染,以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán),氰化鉀逐漸分解,產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出,以致藥物濃度降低,細(xì)菌生長(zhǎng),因而造成假陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán)節(jié)都要特別注意。

(十一)蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g,氯化鈉0g,蒸餾水1000mL,pH7.4。

按上述成分配制,分裝小試管,1210C高壓滅菌15min(蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。購(gòu)買(mǎi)每批蛋白胨后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。)

(十二)靛基質(zhì)試劑

柯凡克試劑:將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。

歐一波試劑:將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL 95%酒精內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。

試驗(yàn)方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36±10C~培養(yǎng)1~2d,必要時(shí)可培養(yǎng)4~5d。加入柯凡克試劑約O.5mL,輕搖試管,陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色;或加入歐一波試劑約O.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽(yáng)性者與液面接觸處呈玫瑰紅色。

(十三)半固體瓊脂

蛋白胨lg,牛肉膏0.3g,氯化鈉O.5g,瓊脂0.35~O.4g,蒸餾水100mL,pH7.4。

按以上成分配好,煮沸使溶解,并校正pH。分裝小試管。1210C葛壓滅菌:15min,直立凝固備用。

(十四)Elek氏培養(yǎng)基(毒素測(cè)定用)

豚胨20g,麥芽糖3g,乳糖O.7g,氯化鈉5g,瓊脂15g,40%氫氧化鈉溶液1.5mL,蒸餾水1000mL,pH7.8。

用500mL蒸餾水溶解除瓊脂以外的成分,煮沸,并用濾紙過(guò)濾。

用1mol/L氫氧化鈉校正pH。用另外500mL蒸餾水加熱溶解瓊脂。

將兩液混合,分裝試管:10mL或20mL。1210C高壓滅菌:15min。臨用時(shí)加熱溶化瓊脂傾注平板。

(十五)氧化酶試劑

1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液:少量新鮮配制,于冰箱內(nèi)避光保存。

1%a-萘酚溶液。

取潔凈白濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴,陽(yáng)性者呈粉紅色,并逐漸加深,再加一滴a-萘酚溶液,陽(yáng)性者于30s內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性于2min內(nèi)不變色。

(十六)乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基

成分:蛋白胨20g,豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。

(十七)三糖鐵瓊脂(TSI)制備方法培養(yǎng)基。

成分:蛋白胨20g,牛肉膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖1g,氯化鈉5g,硫酸亞鐵銨[Fe(NH4)2(SO4)]20.2g ,硫代硫酸鈉0.2g,瓊脂12g,酚紅0.025g,蒸餾水1000mL,pH7.4。

制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂煮沸溶化,加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

(十八)賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基制備方法培養(yǎng)基。

成分:蛋白胨5g,酵母浸膏3g,葡萄糖1g,蒸餾水1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,L-氨基酸或DL氨基酸0.5或1g/100mL。

制法:除氨基酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL,分別加入各種氨基酸:賴(lài)氨酸、精氨酸和鳥(niǎo)氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,校正pH至6.8,對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸,分裝于滅菌的小試管內(nèi),每管0.5mL,上面加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min。

試驗(yàn)方法:接種培養(yǎng)物于36±1℃培養(yǎng)18-24h,觀(guān)察結(jié)果,氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者,由于產(chǎn)堿培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色,陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,對(duì)照管應(yīng)為黃色。

(十九)Honda氏產(chǎn)毒肉湯

水解酪蛋白20g,酵母浸膏粉10g,氯化鈉2.5g,磷酸氫二鈉15g,葡萄糖5g,微量元素O.5mL,蒸餾水1000mL,pH7.5。

制法:溶解后校正pH,高壓滅菌1210Cl5min,待冷45-500C時(shí)加入林可霉素溶液,每毫升培養(yǎng)基內(nèi)含90μg。

微量元素配方:

硫酸鎂5g,三氯化鐵 O.5g,氯化鉆2g,蒸餾水100mL。

(二十)致病性大腸埃希氏菌診斷血清、侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏診斷血清、出血性大腸埃希氏菌診斷血清。

(二十一)產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌LT和ST酶標(biāo)診斷試劑盒,上海市衛(wèi)生防疫站出品。

(二十二)抗LT抗毒素。

(二十三)多粘菌素B紙片:300IU,φ16mm。

(二十四)革蘭氏染色液。

參考資料:食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)

相關(guān)鏈接:尿素瓊脂,磷酸氫二鉀,蛋白胨水

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不同的培養(yǎng)基都有什么特性
1699天前

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