2.2.2 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測與分析

通過在線PredictProtein軟件對AT基因不同拷貝編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)2個蛋白均定位在細(xì)胞質(zhì)；TMHMM跨膜螺旋區(qū)分析表明,2個蛋白均為膜外蛋白，無跨膜結(jié)構(gòu)。SOPMA結(jié)構(gòu)預(yù)測表明,AT蛋白中，無規(guī)則卷曲占比最高,均在43%左右,其次為x-螺旋,約占35%，延伸鏈約占18%,β-轉(zhuǎn)角約占4%，兩蛋白有一定差異(表4)。

2.2.3 蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)預(yù)測與分析

經(jīng)SWISS-MODEL同源建模發(fā)現(xiàn),114、148均適應(yīng)酰基轉(zhuǎn)移酶模型,但其構(gòu)象略不同(圖1,2）。

2.3 過表達(dá)與RNAi干擾重組質(zhì)粒圖譜

AT基因的2個拷貝114與148過表達(dá)重組質(zhì)粒見圖3-A。AT基因的2個拷貝114與148RNAi重組質(zhì)粒見圖3-B。

2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥檢測

經(jīng)潮霉素篩選T0轉(zhuǎn)基因擬南芥種子后(圖4),對T1進(jìn)行pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148載體潮霉素鑒定,結(jié)果表明(圖5),目的質(zhì)粒T-DNA均已插入擬南芥基因組,表明擬南芥轉(zhuǎn)基因成功。

由表5可知,與野生型擬南芥種子脂肪酸各成分相比,干擾114基因(114R)表達(dá)會導(dǎo)致硬脂酸和油酸含量極顯著的增加,增加幅度分別為10.25%,38.33%,而軟脂酸和亞麻酸是極顯著的減少,減少幅度分別為10.57%,17.90%,顯著減少亞油酸的含量,花生烯酸的含量也有減少,但是差異不顯著；過表達(dá)114基因(35s-114)會導(dǎo)致軟脂酸、油酸和亞油酸含量的顯著增加,增加幅度分別達(dá)到15.52%,37.88%,12.33%,而硬脂酸、亞麻酸和花生烯酸含萬方數(shù)據(jù)量達(dá)到極顯著的減少,幅度分別為50.22%,10.86%,29.93%。

在對飽和脂肪酸與不飽和脂肪酸分析中,干擾114基因會使飽和脂肪酸含量下降,對不飽和脂肪酸無顯著影響；過表達(dá)114基因會增加不飽和脂肪酸的含量,而對飽和脂肪酸無顯著影響。

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