我國具有悠久的飲茶歷史。傳統(tǒng)意義上的茶葉由于含有茶多酚，其抗氧化、清除自由基的功能已為人們所熟知。茶多酚是一一類多酚類化合物，它作為茶葉中的主要有效成分，占茶葉干重的30％左右，其來源廣泛。近年來研究表明，茶多酚具有多種藥理效應，如降脂、防止血栓形成和抗衰老、抗心肌缺血等作用。綠茶富含茶多酚和茶多糖，具有很好的保健作用，因此近年來作為一種暢銷茶飲料走入人們的生活。本實驗以綠茶為材料，觀察了綠茶提取物對Ⅱ型糖尿病大鼠糖耐量的影響，探討其對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用及對兔刷狀緣囊泡葡萄糖轉運能力的抑制作用，以期為揭示綠茶的降糖作用機理提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

綠茶，湖北省宣恩縣五家臺茶廠生產的級外炒青綠茶。酵母α-葡萄糖苷酶(來源Saccharomycessp.)日本和光公司；豬α-胰淀粉酶(type1-A)Sigma公司；大鼠胰島素酶免試劑盒法國SPI-BIO公司。

IWAKIREN-1型旋轉蒸發(fā)儀；EYELAFDU-830型冷凍下燥儀；德國Bayer微量血糖測定儀：HITACHIU-2010型紫外分光光度儀；Wallac1209Rackbeta閃爍記數器。

1.2 綠茶提取物的制備

100g綠茶用2L蒸餾水浸泡過夜。過濾后濾渣重復提取三次。將提取液合并后，減壓蒸餾、冷凍干燥得綠茶干粉。其茶多酚含量為37.9％(酒石酸亞鐵比色、法)，茶多糖為6.1％(蒽酮硫酸法)。

1.3 動物分組及糖耐量和胰島素測定

取16只GK/Jcl雄性大鼠(Ⅱ型糖尿病模型日本株式會社)，體重為259～28lg，隨機分為兩組。實驗組大鼠以0.5g/kg劑量灌胃綠茶提取物同時灌胃蔗糖或淀粉，對照組則以蒸餾水代替綠茶提取物。糖耐量測定方法是，斷食16h后，灌胃蔗糖2g/kg或可溶性淀粉2g/kg，在0、0.5、1和2h用微量血糖測定儀測定血糖。胰島素測定按試劑盒說明常規(guī)進行。

1.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定

α-葡萄糖苷酶的抑制活性的測定采用渡邊等的方法。將α-葡萄糖苷酶溶于含有1g/L牛血清白蛋白的pH7.0100mmol/L磷酸緩沖液中作為酶液，4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷溶于相同緩沖液中作為底物液。取10μl樣品、240μl(0.053U)酶液和750μl底物液，在37℃反應15min。用0.5mlTris溶液停止反應，測A_400nm和IC₅₀值(IC₅₀定義為抑制酶活性50％時所需的抑制劑濃度)。

1.5 α-淀粉酶抑制作用的測定

將10μl淀粉酶溶于4ml含有50mmol/LNaCl、5mmol/LCaCh、0.5g/LTritonX-100的pH6.925mmol/LPiperazine-N，N’-bis2-ethanesulfonicacid(PIPES)緩沖液中作為酶保存液，測定時用緩沖液稀釋40倍使用。反應體系由650μlPIPES緩沖液、50u1樣品液、100μl酶液和200μl25g/L可溶性淀粉溶液組成，在37℃反應10min，用0.5ml100ml/L乙酸溶液停止反應，碘法測定A_700nm和IC₅₀值。

1.6 刷狀緣囊泡葡萄糖轉運能力的測定

將兔小腸浸泡于300ml含200mmol/L甘露醇的pH7.42mmol/LHEPES[N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N’-(2-ethanesulfonicacid)]Tris緩沖液中，刮取小腸黏膜，在冰浴中高速勻漿2min。勻漿液中加0.619固體MgCl2，冰浴攪拌20min后，在4℃3000×g離心15min，所得上清在4℃3500×g再離心30min。此沉淀用10ml含100mmol/L甘露醇、0.1mmol/LMgS04的pH7.42mmol/LHEPES-Tris緩沖液溶解，在4℃35000×g離心40min，所得沉淀用3倍體積含300mmol/L甘露醇、0.1mmol/LMgS04的pH7.4 10mmol/LHEPES.Tris緩沖液重新溶解，用25號注射針頭反復抽吸，即得刷狀緣囊泡懸液。以³H-D-葡萄糖為底物，用快速過濾法測定刷狀緣囊泡葡萄糖轉運能力。抑制葡萄糖轉運活性50％時所需的抑制劑濃度定義為IC₅₀。

1.7 統(tǒng)計學處理

數據均以X±S表示，并采用統(tǒng)計軟件進行t檢驗。

2 結果與分析

2.1 綠茶提取物對糖尿病大鼠糖耐量及血胰島素水平的影響

蔗糖或可溶性淀粉負荷后2h，糖尿病大鼠血糖水平較對照組明顯降低，但血胰島素水平基本沒有變化(表1、2)。

2.2 綠茶提取物對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用

綠茶提取物具有較強的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50值為0.13g/L。綠茶提取物對α-淀粉酶也顯示出抑制活性，濃度為1g/L時，其抑制率為21％，抑制活性較弱。

2.3 綠茶提取物對兔小腸刷狀緣囊泡葡萄糖轉運活性的影響

響綠茶提取物劑量依賴性降低兔小腸刷狀緣囊泡的葡萄糖轉運活性，其IC50值為3.5g/L。隨著濃度升高，兔小腸刷狀緣囊泡葡萄糖轉運活性降低幅度明顯減小，呈直角雙曲線關系。其對刷狀緣囊泡葡萄糖轉運的抑制作用為快速反應。

3 討論

在糖尿病降糖藥物家族里α-葡萄糖苷酶抑制劑是一組通過延緩糖的消化和吸收來達到降低餐后血糖目的的口服降糖藥，其作用特點是在糖消化的最后一步抑制雙糖降解為單糖。α-淀粉酶抑制劑也能減慢食物淀粉在腸道中的消化，抑制餐后血糖水平的升高。因此兩者是近年來糖尿病口服藥物開發(fā)研究的熱點。腸道對葡萄糖的吸收則以葡萄糖轉運體的主動吸收來完成，因此抑制葡萄糖轉運活性是降低餐后血糖的重要環(huán)節(jié)之一。本研究表明，綠茶提取物是α-葡萄糖苷酶的抑制劑，對α-淀粉酶也有一定抑制作用，同時降低兔小腸刷狀緣囊泡的葡萄糖轉運活性，但沒能改變對本模型血胰島素水平。綠茶提取物具有降糖作用，主要表現為能降低糖尿病大鼠蔗糖或淀粉負荷后血糖的持續(xù)升高趨勢，從而改善其糖耐量。研究認為這一作用可能與綠茶提取物對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用及葡萄糖轉運活性的抑制作用有關。

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